#高三生物怎么学大家期待已久的引物的设计与选择终于出炉啦！大家快来看吧！

race巢式特异性引物怎么设计

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发布时间：2025-11-07 10:35

保定市优博教育

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引物❓️如何设计和订引物❓️视频版✨
引物是一种用于启动特定DNA或RNA合成的一小段单链核苷酸序列。在PCR、DNA测序、基因克隆、定点突变等技术中起到关键作用。关键作用。
✅引物是什么
✅引物作用原理
✅如何设计引物
✅在哪里订引物
#实验室日常 #博士 #生物实验 #研究生日常 #pcr
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超详细的基因引物设计方法超详细的基因引物设计方法#PCR #qPCR #引物设计
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378孔丫
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还不会配qpcr体系的兄弟姐妹👭来看这个视频，看完之后还有疑问的，我们评论区见！
[得意R]从如何配体系，如何加样，如何计算，视频都有详细教学，只是视频时长有点稍长🥹🥹#科研 #医学实验 #QPCR #分子实验#小技巧
58瑞瑞啊
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PCR鉴定基因型（实验流程+原理+引物设计✅
已知基因突变位点之后，每次送测序鉴定基因型还要等结果反馈，其实自己在实验室就可以用PCR鉴定啦～
✅基因组提取
剪尾放入50mM NaOH中，95℃裂解15-30min，加入1/10体积ph=8的TrisHCl中和
✅双引物法
在敲除位点上分别设计WT、MT特异性上游引物，公共区域设计下游引物，分别扩增WT、MT通过琼脂糖凝胶电泳条带有无判断基因型
✅酶切法
在敲除位点上下游200-300bp分别设计上下游引物，PCR扩增后选择敲除前后酶切位点改变的限制性内切酶，酶切后进行琼脂糖凝胶电泳区分条带大小（看运气有时候未必有就只能双引物啦）
🔥注意事项🔥
需要提前摸索好扩增条件，结合测序结果得到特异性引物及扩增条件。需要大量鉴定时可以使用吉尔森多道移液器一次在96孔板中加入8/12个样品，十分钟完成96孔板体系配置～
#PCR #基因敲除 #科研大G #PipetmanL #超吉移液器
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qpcr实验步骤视频版🔥
qPCR实验通过ΔΔCT法计算出flod change从而得到RNA在不同处理下的表达情况。那么实验过程是怎么样的呢？今天我们跟着视频一起来看一下吧~
✅实验准备
提前准备好cDNA（模板）、引物、SYBR mix、ddH20、耗材等
Tip：在冰箱里长期放置的试剂会挥发或析出沉淀导致液体不均匀，所以试剂都需要先涡旋混均后离心才可以打开使用~在使用时候要记得轴对称配平和拧上保护盖哦~
✅试剂配制
一般情况下配制20uL体系进行qPCR实验，为了节省试剂和样品，也可以配制成10uL体系哦~因为需要配制复孔（技术学重复）以减小误差，所以可以先将除了cDNA以外的试剂配完，分装到PCR板上，再逐一添加cDNA
试剂体积
2x SYBR mix 5ul
引物F/引物R 0.25ul/0.25ul
ddH20 2.5ul
cDNA 单独加入2ul
✅PCR布板
每一行连续的三个孔（如A1、A2、A3）作为技术学重复，加入一模一样的体系和cDNA。可以在板子上先每三个画一条竖线区分。
给大家分享一个小技巧，做qpcr实验结果想要稳定就需要加样准确无误差的移液器，比如我们实验室就会单独放在一个实验台只进行定量实验，加样的时候可以边加样边抬手，让液体自然靠近pcr板，这样能够减少组内差异哦。
✅上机过程
✅数据计算
得到qPCR结果后，去除不符合实验要求的孔（点击omit），在三组生物学重复中使用ΔΔCT法计算相对表达量。可以在表格里直接计算哦~
#研究生日常 #实验室日常 #poppy的科研生活 #qpcr #医学生
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