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这期视频我们分享贴壁细胞传带的标准操作实验操作前我们先准备所需的培养机,胰酶 p b s 离心管、 t 二五培养瓶以及无菌枪头等,注意是继续提前预热。接下来我们进行认习步骤, 先抽走培养瓶内培养机,然后加五毫升 p b s。 润洗一到二遍,清除残留的完全培养机, 我们加这个培养机,还有加这个 pps 啊移煤。这种时候我们要稍微注意一下, 注意一下这个瓶口,有时候这个瓶口他容易残留,有一点那种降低可能附着都有一些细胞在上面,所以这个枪口稍微离这个瓶口稍微远一点。 润洗完成后,我们进行消化步骤,这个一枚我们要把一枚,然后加到这个跳舞里面去。我们先在 t 二五瓶内加一毫升一枚, 上下左右摇晃铺匀后放置在三十七摄氏度培养箱中进行消化, 就消化到这种边缘开始脱落了,然后中间但是还没完全脱落的时候就可以了, 对消化时间把握不大,可以每隔三十秒左右即吸取瓶内一枚,轻轻吹打一下,若细胞可以很轻松吹下, 即可终止消化,若不能则继续消化。三十秒左右 消化完成后,立即加三到四倍仪没量的完全培养机终止消化, 然后用一夜气吸取瓶内培养机吹落贴壁的细胞,注意控制吹打力度,吹打过程勿产生过多气泡。 之后将 t 二五屏内细胞旋液转移至离心管中,进行三分钟离心收集细胞转速为一千转美分。 在离心的同时,我们分别在两个 t 二五培养瓶内加十毫升培养机, 离心完成后,仙气离心管内上倾, 然后加五毫升 p、 b、 s 轻轻重旋细胞进行润洗, 吹打个十来下就可以了,就给上面的沉淀先给他吹起来,然后再给他吹散, 之后再进行三分钟离心,转速为一千转每分, 离心完成后,气离心管内上氢,然后加二毫升锌,培养机轻轻重旋吹散细胞, 再在培养瓶内接种一毫升细胞血液, 轻轻混匀后,就可以将细胞放入培养箱中继续培养啦。



培养箱里取出培养瓶后,用一夜吸管吸去就培养基。加入六毫升 pbs 润洗细胞, 轻晃培养瓶,使 pbs 溶液完全接触细胞,吸去 pbs, 加入二毫升移媒后 放入三十七摄氏度培养箱里消化两分钟。取出培养瓶,轻拍瓶身使细胞脱落,加入四毫升新鲜培养机,中止消化。 轻轻吹打细胞后,液体收集入干净离心管中,一千两百转离心五分钟,离心机一定要配平哦! 离心结束后,吸去上清液,加入新鲜培养基,重旋细胞沉淀,轻轻吹打混匀细胞后 滴入玻璃片上, 进行细胞技术操作或传代培养。