农杆菌转化法动画怎么用豆包生成

大家好，今天我们来深入的学习一下经工程中一个非常重要的高频考点，那就是农杆菌转化法，这个技术是将目的基因导入植物细胞的一种常用的方法，在历年高考题中频繁的出现。 我们这节课主要是帮助大家梳理他的原理流程，还有常见考点，特别是会结合西北五省的特色的作物来进行分析，希望能够在今年的高考中帮助到大家。 首先我们来看一下基本原理，农杆菌它是一种土壤细菌，它有一个非常特殊的本领，就是能感染植物，并将自己身上的一段 dna 转移到植物细胞里面去。 这个本领的关键就在于它体内有一个叫做 t i 之力的环状 dna， 这个 t i 之力上有两个重要的区域， 一个是 t d a 区，一个是 vr 区， t d a 就是 我们将要转移的那个片段，而 vr 区则是负责执行转移的整个过程。理解这两个区域的功能是我们掌握龙杆菌转化法的基础。 那么转化的本质是什么呢？简单来说就是农杆菌把自己的 t i。 智力上的 t d i 片段像快递一样给送到植物细胞里面去， 而且这个片段还能整合到植物的染色体上，成为植物基因组的一部分。科学家就正好利用了这一种天然能力 对 t i。 智力进行了改造，把他们原本身上能导致植物生病的基因给去掉，换成了我们想要导入的目的基因，这样龙感酒就变成了一个高效的安全的基因，快递员就可以带着我们的目的基因 带入到植物细胞染色体上去，接下来我们来看一下它的具体的操作流程。第一步也是最关键的一步就是构建重组的 t i 制粒，我们需要用限制酶和 dna 连接酶把目的基因粘贴到 t i 制粒的 t d a 区域， 同时保证基本表达原件的完整性。第二步，把这个重组智力导入农杆菌，通过钙离子的处理，让农杆菌变成高效的基因运输车。第三步，用这些携带了目的基因的农杆菌 去侵染植物的外植体，通过共培养让农杆菌把目的基因送入植物细胞，完成目的基因送达的过程。 那么基因导入之后，我们怎么知道哪些细胞成功了，哪些细胞没有成功呢？这就需要第四步，也就是筛选。我们利用标记基因，比如说抗生素，抗性基因在含有抗生素的培养基上 只能生存下来成功转化的细胞，那些转化不成功的就都死掉了， 这就完成了筛选。第五步就是将这些存活的细胞通过植物组织培养技术，经过脱分化和再分化，最终培育成完整的支柱，这一步利用了植物细胞的全能性。最后一步也是必不可少的一步就是检测和鉴定，我们需要从 分子水平和个体水平来进行检测，分子水平上像 dna 的 检测， rna 的 检测，蛋白质 这三个层面的检测，这样能够确定目的基因是否成功整合和表达。然后我们再从个体水平去检测蜘蛛是否表现出预期的现状，比如说有没有表现出抗虫现状，有没有表现出抗病现状等。 现在我们进入高频考点部分，首先就是基础概念，第一个龙感酒转化法主要是适用于双子叶植物，但是现在技术拓展到了单子叶植物，特别是我们西北的棉花、马铃薯等这些作物。第二个就是关于 t dna 的 特点， 这是高考的必考点，大家需要把它记住，只有 t dna 能够被转移，而且它的转移是指任边界 不认内部的内容。第三个要准确理解转化的定义，他不仅仅是一个简单的导入，他还要能够稳定在细胞内存在，且能正常的进行表达。 我们再来看一下操作细节类的考量。考点四，目的基因的插入位置是非常关键的，必须要插在启动字和终止字之间，否则他无法表达。考点五，两次拼接与两次导入，这是一个高频的简答题，大家需要 理清人工操作和自然过程的区别。考点六就是分类化合物的作用， 植物在受伤之后会产生分泌化合物，它既是导航也是开关，引导龙感九并启动转移程序，这在转化单子叶植物时是尤为重要的。 考点七是与其他转化方法做一个比较。龙感九转化法的优点，稳定，效率高，成本也低，但是它有一定的物种限制，主要是用于双子眼珠。 而基于枪法，虽然不受物种的限制，但是它的设备昂贵，成本高，且容易发生多拷贝整合，稳定性差。 花粉管图道法，这个是我国科学家独创的一种技术，操作极其的简单，不需要进行植物组织培养，非常适合水稻、小麦等这些农作物的大规模的转化，但是其转化效率非常的低。 烤脸吧是基因标记基因，主要标烤脸吧，烤脸吧是标记基因， 注意，标记基因它主要分为两类，第一类是筛选标记基因，它的作用就是筛选通过抗生素或者除草剂把没有转化成功的细胞全部淘汰掉，只留下活下来的阳性细胞。 第二类是报告基因，比如说我们图片上展示的这种绿色荧光蛋白 gfp， 它的主要作用就是报告，就是让我们肉眼或者显微镜下能直接看到基因到底有没有表达，并且或者是表达在了哪些地方。这两种基因在基因工程里面各司其职，都是非常重要的点。 接下来我们看一道去年的真题，这道题是以马铃薯作为背景，考察了三个核心的知识点，第一个就是 t、 d、 a 最终整合到哪里去了， 当然这个明显是我们知道它整合到植物细胞染色体的 dna 上。第二个就是筛选用什么？ 答案是抗性基因。第三个是从育伤组织到完整的植株需要什么过程，这很简单，形成育伤组织是脱分化，那么育伤组织变成植株，那就是再分化。这道题是一个非常典型的将基因工程和植物组织培养给结合起来了，是高考的一个重要的趋势。 再看一个甘肃卷的题目，这道题结合了 c r s p r 基因编辑技术。 问我们将重组智力转入植物细胞，用什么方法呢？答案是酶解转化法 以及什么片段会被整合，自然是 t、 d、 a， 还有筛选时加什么？答案自然是抗生素。 这道题在提醒我们，无论技术如何的更新楼，感觉转化法都是基础工具，他这个地位是非常稳固的，其核心原理自然是考试中的重中之重。 最后我们来总结一下常见的一错点。第一个也是最常见的错误，就是混淆 t i 之力和 t d a， 大家一定要记住 t d n a 是 t i 之力的一个片段，只不过这个片段会被转移。 第二个目的，基因的插入位置，这个必须要在 tdna 的 边界之内，并且要有启动词和终止词， 否则它无法转录。第三个就是关于它的使用范围，不要局限于只能转化双子叶植物的这个旧观念，因为现代技术已经把它拓展到了单子叶之外。 易错点四看一下，你看他说启动子和中指子、中指密码子的区别，注意，启动子是在 dna 上，它管转录的， 而起始密码子是在信使 rna 上管翻译的，这俩标互了。第五个易错点是 不要以为基因导入了就完事大吉了，从导入到发挥功能还有很长的路要走，受到多种因素的影响。第六个就是再次强调两次导入的区别，第一次是把智力导入到农杆菌， 第二次是把 t d a。 导入到植物细胞，它的对象以及和物质都是不同的。为了让大家更直观的能够巩固这些知识，我们来看两道西北特色的作物的预测题，这道题是关于新疆棉花的 抗初联培育，他考察了工具为操作步骤和检测方法。第二题是关于宁夏枸杞的抗旱改良，考察的核心原理， 整体结构和方法比较，大家可以尝试着自己做一下，打在评论区，我们来进行讨论，这两个都是非常经典的考量组合。 最后呢，我们来总结一下，给大家总结一个口诀，一定要牢记这种核心原理，掌握完整的流程。 同时因为我们作为西北地区，他这种作物是很具有特色的，所以一定要注意把这种特色作为作为特色作物，作为情境题作为考察， 这样我们在练习的时候就能够有一个熟悉感，以便我们真正如果遇到类似题目的时候能够入手，能够找到它的关键点。最后预祝大家能够在二零二零二零二六年的高考中取得一个优异的成绩，谢谢大家！再见！

生物学必会实验之农杆菌转化星座今天师姐手把手来教你。首先拿出来要用到的农杆菌感受肽和电转杯，电转杯优先选这种宽口径的，可以清洗的更加干净，转进去的成功率高。先来用七五乙醇清洗三遍电机杯，然后再用无水乙醇清洗三遍，这一步非常重要， 在清洗的时候要让无水乙醇浸润到每一个孔隙当中，清洗之后要用电吹风把它吹干，保持干燥，这一步也很重要，这两个点真的是我之前失败的经验总结。下一步就是将干燥好的电击杯放在冰上预冷，这个就是我们要用到的仪 器，把它按到 back 里的模式上面，选择 a j r 浓杆菌的程序，然后把这个用来固定电击杯的条拉出来备用。此时只需要吸取零点五微的智力，转到浓杆菌的感受态当中， 如果你的智力浓度过高，可以进行一定的稀释再转，加进去之后充分混匀，然后再转移到电击杯当中。我一般会这么蹲两下，保证它均匀的分布在这个电击杯的槽中，擦干之后按照这个口对齐放进去就可以转了。卡进去之后我们点击 pos 就 可以转了， 就代表他转成功了。然后再来检查一下他的电压数值，没问题。再将我们准备好的无抗 l b 吸取两百微打到电击杯当中进行混匀，后面再转移到离心管当中，就可以拿去窑菌了。摇床的温度是二十八度，摇一个小时就可以涂板，农杆菌的板子大概需要生长两天左右。让我看谁还不给师姐点关注！

本次配菌所需物品手部消毒，进入超镜工作台，待手部酒精挥发后，点燃酒精灯， 打开 l b 液体培养机， 做好标记，向 l b 液体培养机中加入相应抗生素，微生物抗性不同，加入抗生素种类不同， 摇晃均匀， 做好标记，倒入离心管， 取甘油菌， 待解冻后加入含抗生素的培养机中。 将军业至于二十八摄氏度，摇床二十四小时，培养 第二天设置五千转离心十分钟收集菌体，离心完成后，取出 倒出液体，加入脓杆菌转化液重旋 丹克隆培养一天一夜的 o d 六百差不多为二点四，转化液重旋的中浓度约二点零就可以超过零点八度，有效，不用太精确。下一节开始侵染有哪些细节我们将详细介绍。

你能见龙杆菌侵染之后怎么收种子呢？我们只要把它侵染了两到三次之后，所有的种子都是要保留下来的，我们都收到一起，然后再放在培养敏去筛。我们一般怎么收种子呢？就是这个样子，拿一张稍微大一点的纸，可以用 a 四纸，也可以用一张报纸， 然后给他稍微折一折。比如说我们侵染了五盆苗，我们就把这五盆所有的种子都收到一起，一般就是对角线这样折一下，然后把它铺到下面， 纸大一点，不容易让其他的种子飞到别的地方去。这个就是我亲染过两次的米兰界蜘蛛哈，然后我们收种子的时候，就是看他哪里成熟了，就把他给搓一搓，这么搓一搓，然后种子就掉下去了。 一般亲染之后呢种子我都会比较小心的收，就是尽量不要错过一颗种子，所以只要他有一点点成熟了，我就收一点，呃，成熟一点我就收一点。 如果要是你等他整株苗都成熟的时候，那样很多种子其实都已经掉了，也就损失了很多种子，所以我就会多收几次，这样子有阳性苗的几率就会更大一些。一搓然后就会听到种子掉到纸上的声音，非常治愈。这个收好之后呢，我们就给他扒拉到一起， 聚拢一下，给他折成一个小方块，块 好就给他折成这个方块，然后上面写上名字， 这个就放到三十七度的培养箱里面，呃，或者烘箱都可以给他烘干就好了。因为我们收的时候可能会扒拉下来一些搅和的皮呀，其他的一些乱七八糟的东西，所以一般我们会用一个筛子筛一筛，筛完之后就可以去铺种子了。

我刚刚涂了一个很完美的胶涂，现在涂完这个转化浓感的版就要下班喽，拍个视频记录一下，再进超音台自己，我需要喷酒精备受消毒。 好啦，喷完酒精搓搓手，我们就开始干活啦！首先打开利津管的盖子，然后把上层的清液倒掉，用徒步枪头和剩余的液体培养机将菌体吹吸混匀之后将所有的菌液吸到固体培养机上， 然后将徒步枪头压完之后就可以开始徒步啦。我们要均匀的将菌液涂布在固体培养机上，直到菌液被固体培养机完全吸收为止， 一直涂一直涂，一直涂一直涂。然后呢，将枪头打掉，将培养机的盖子在酒精灯上过一点灭灭菌，就可以在培养机底部写上他的名字和日期啦， 这样就涂好一个啦！接下来就是十倍速播放涂剩余的七块板子，哈哈，就是这么重复机械的工作。 最后一块板子涂完喽，现在我们要给所有的板子都上膜 封口膜的作用呢就是为了隔绝板子染上外界的杂菌，这样我们就把它可以放心的放在培养箱里进行培养了。同样也是十倍速封好八块板子，每一块板子我通常习惯封上两圈，这样安心一些 啦！涂完喽，厚厚的一摞板子，然后现在我们要把这些送到培养箱去， 就可以下班喽！今天涂的浓干板准备下班，师姐等着我去吃饭，这个就是二十八度培养箱，专门培养，专门培养我们的龙感德。 当当当当结束啦，拜拜，我们去吃饭喽！

对龙杆菌不太敏感的单子叶植物具体的转化操作除了添加 a s 以外，还有什么步骤可以促进龙杆菌的侵染？推荐可能可以多尝试不同的兽体，可以用我们的下胚轴或者是我们的胚去更换一些兽体材料，可能会达到 意想不到的效果，激素的配比也是非常重要的。另外的话，在侵染这一步，我们可以适当的去增加它的压力，稍微一些外部压力的方式可以使用摇床 去促进这个溶杆菌跟我们的植物受体的接触的面积和接触的压力。好，大家可以往这个方向去努力。溶杆菌它摇的那个 o d 值 对于整个菌的活性状态还是蛮重要，摇着摇着就有点摇过了，而摇过了之后，侵染的时候是不是也是对它的 整个的侵染效率是会有一定的影响？龙杆菌的压力给到我们植物受体，他一定要有一个非常适当的这个 o d 值，因为压力小了，他的龙杆菌侵染不进去，嗯，最后我们的转化效率会变得比较低，但是如果龙杆菌过高，龙杆菌自身对我们植物受体的伤害就 会变得非常严重，我们植物受体他承受不住这个压力，所以我们龙杆菌的 o d 值的选择一定要需要去做很大量的实验来摸索来探索的，对。

哈喽，各位同学大家好，今天我们讲解一道二零二五年山东高考基因工程的压轴题，我们直接看题。种子休眠是抵御穗发芽的一种机制，通过对 t i 基因的改造，利用龙杆菌转化法将 t i 基因上的 t d、 n、 a 随机整合到小麦基因组中，筛选到两个种子休眠相关的基因插入失活的重合脱变体。 与野生型相比，突变体种子萌发率较低，它就是将 t i 指令插入到基因组当中，然后插入了之后是不是就会破坏掉某些基因破坏了这个基因失活之后就会影响种子的萌发。那这个就是提纲给出的信息。 我们来看第一问， t i 指令上与其在龙杆菌中复制能力相关的结构，为什么？是不是就是考的指令上面一些重要的结构和原件啊？ 那和复制能力相关的，我们这个结构是不是就叫做复制原点呢？这个是很基础的知识啊。继续往下看，选用图甲中的 sma one 对 除草剂基因 x 进行完全没切，再选择 sma one 和什么对 t i 指令进行完全没切，然后将产生的联系末端补平。 补平使用的酶是什么？我们来看一下 s m a one 对 x 基因进行切割，这里是 x 基因， s m a one 是 不是就在这，在它的两端进行切割？那我们再来看一下 s m a one 的 识别区是不是长这样，它切割的位点是不是位于中轴线这里啊？所以它产生的是 屏幕端对不对？哦，那我们是不是就懂它为什么要补平了？因为其他的煤你看都是连芯末端对不对？你要将屏幕端和连芯末端相连，直接相连，这是不可能的嘛，所以你要将连芯末端补平为屏幕端，你才能通过定义连接进行连接，是不是？那我们应该选用 sma 一 和什么对贴制进行完全没切呢？我们来看一下基因上面它有哪些酶切位点？有八麦曲管，八麦曲管能用于切割吗？大家说 肯定不能对不对？因为八英寸在中指指上面，它有一个识别位点，如果你用八英寸去切割，中指指是不是就被破坏了？所以八英寸我们首先淘汰掉，那还有什么？八英寸不行？那是不是就是在 pst one 和 x 八 one 中间去做选择了？ 那我们要将连心末端补平，我们就来看 x 八 one 和 p s t one 它产生的连心末端是什么样子的？那我们给大家把这个序的结构给大家在这画出来行不行？首先前面有个 x 八 one， x 八 one 识别序是 t c t a g a 五撇端 t c t a 三撇端 a g a t c t 这就是 x 八 one， 然后 x 八万过了之后有一段续列，然后又到 p s t one， 是 不是？然后我们再来画一下，然后这有一段续列，然后是 p s t one p s t one 识别是 g t g c a g g t g c a g 下面就是 c a c g t c 然后这是什么？ ps， t one 过了之后是又一段系列，然后有个 sma one， 对 不对？然后又一段系列 sma one 是 不是 ccc 叽叽叽，然后上面还有一些启动子终止等原件，我这里就不画了哈，这是一个环状的指令，对不对？就成环。那我们刚刚说了，我们是在 x 八 one 和 pst one 当中去做选择，首先是用 sma one 去切割的载体，那我们来看一下它切割产生的切口是什么样子的？ p s t one 是 在这儿，然后 x 八 one 是 在这儿，也就是这里切割是 p s t one 产生的连线末端， 这里切割是 x 八 one 产生连线末端，对不对？刚也说了，我们要将连线末端补平，补平是意思，是不是？就是说以下面的这条链作为模板，将切口这里有理的剪辑给它挨个的加上去啊，对不对？ 所以它是不是就是 dna 聚合酶的功能，对不对？这大家应该是可以理解的哈，那 dna 聚合酶它有一个特点，它只能从五撇端向三撇端延伸，对不对？ 那我们来看哪个切口能从五撇断向三撇的延伸？如果是用 pst one 和 sma one 进行切割，这两个没切割之后，是不是就中间这一段序列就没有了？这一段序列是不是就被切下来了？切下来之后你要补平只能从五撇断向三撇的延伸，那你看一下 pst one 它产生的切口能不能从五撇断向三撇的延伸？你看这边是三撇断， 这边是五撇段，所以你要不平，是不是从三撇的向五撇段啊？这个，所以它方向是不是就反了呀？因为我们的 dna 聚合酶只能从五撇端向三撇端进行延伸，那你看如果用 x 八 one 和 sma one 进行切割，是不是中间的这一段序列全部都被切割了？ 这一段全部被切走了是不是？那切割产生的这个切口是不是？你看这里是五 撇端，这边是三撇端，它是不是就可以从五撇端向三撇端进行延伸？所以你就能将有理的剪辑挨个挨个地从这儿加上去，补成一个屏幕端，然后通过定力连接酶将我们的目的基因两端，它也是 s m a 一 切割的，它也是屏幕端 进行连接，是不是？所以这里应该是使用什么酶？是不是用 x 八万进行切割，对不对？所以对于引物选择这类题目，大家实在不会，你就把这个序列啊给它画出来就可以了，就看得一清二楚。这个方法真的是非常好用的啊， 大家可以进行尝试一下，补平所使用的酶是什么呢？那我们刚刚是不是说了就是 dna 聚合酶啊？然后接着往下看，然后将切割后的 x 基因和 t i 指令进行连接，构建了一个重组指令， 对不对？意思就是说将这个基因和这个染色体进行连接，组成了一个重组子粒，转化大肠杆菌，经卡拉霉素筛选，我们这是有卡拉霉素的抗性基因的嘛？ 是不是筛选之后提取指令，再选用限制酶什么进行完全酶切并电泳检测，如果电泳检测结果呈一长一短两条带，较短的条带长度为多少 bp， 这一定为正向重组指令。 那是不是就是让我们判断什么情况下为正向，什么情况下为反向啊？是不是？那我们就再画一下不就可以了吗？是不是？来我们直接画一下 x 基因，它两段都是 sma one 的 切割位点， 我们再来画一个 x 基因的 sma one 的 切割位点，是不是 c c c 七七七，这个是不是 x 基因的结构？同时它的中间这里还有一个 sp one 的 切割位点，是不是？我们再给它画上去？ 这里还有一个 s p e one 的 切割位点，那如果是正向连接，我们来看长什么样？我们这里是不是已经补齐了，通过 d a 就 会没补齐，补齐之后它就长这样？ c t a g， 然后我们用 s m a one 对 目的基因进行切割，是不是就是在这里切了一刀，这里切了一刀， 所以中间这个就是我们切割后产生的目的基因的序列，对不对？那如果是正向的，是不是就直接将这个序列给它插入进来就行了？那它是不是长这样？ g g g c c c， 然后中间一段序列，然后这边是 c c c g g g， 这就是正向连接的， 然后中间有一个 s p one 的 切割位点，那同时它这里还给了一些片段大小，左边这里是两百 b p， 右边是五百五十 b p， 对 不对？那我们就来再画一下，这边是两百 b p， 这边是五百五十 b p， 这个是正向连接产物，那如果是反向连接，是不是就是将这个片段给它旋转一百八十度？旋转一百八十度，你的五百五十 b p 是 不是到左边去了？这两百 b p 是 不是到右边来了？是不是？那反向连接是不是就长这样？反向连接我用紫色来写哈， 这个就是五百五十 b p， 然后这边是两百 b p， 这个是反向连接，旋转之后它这两段的虚列也是不变的哈。那我们现在应该用什么媒去切割呢？ 你可以看到连接之后，左边这个 x x 八 one 的 识别区列是不是也没有了呀？因为你看 x 八 one 的 识别区列是 t c t a g a， 你 看连接之后，这里就是 t c t a g g 了， 这里就没有了 x 八万的识别序列。那你看画个图，你一看你就知道是是什么眉了，对不对？你看你这识别序列是不是就已经只有这两个眉了，对不对？都画出来了答案，所以你现在一看是不是画图就很清晰明了了？正向用这两个眉去切割，就会产生一个五百五十 b p 的 小片段，那如果说是反向呢？ 反向我用这两个眉去切割，我是不是就会产生一个两百 b p 的 片段啊？那线织眉选择是不是应该就是用 sp one 和 sma one 啊？ 画图是不是很好用？一长一短两条带吧，对吧？同时，如果说要一长一短两条带，你用一个线子眉去切割的话，你是不是只能将一个环状的这种齿力切割成这样的线形的？所以一般来说都是要用两个线子眉。那也告诉我们答案，这里应该是填两个线子眉哈， 那脚短的条带为多少？切割的这个条带是不是就是五百 b p 啊？然后另外一个很大的条带是不是就是外面的这样的，这么这么大一个条带啊？这就是大条带吗？小条带就是中间这个吗？对不对？那他如果问你 一定为反向呢？你填多少？是不是就填两百啊？如果大家实在是理解不了这个过程，就画图。 ok， 我们继续往下看。为证明这两个突变体是由于 t dna 插入到小麦基因组中的同一基因导致的，提取金主 dna 经过酶切后产生含有 t dna 的 片段，如图一所示， ok， 这是它 t dna 的 序列， 在此酶阶段中，由于后续披萨难以扩增大片段， dna 最好使用识别缩列为几个剪辑队的限制酶难以扩增大片段，说白了就是要扩增小片段嘛，小片段就好扩增嘛。那如何才能获得小片段呢？那如何才能获得小片段呢？比如这是一段金主 dna， 我 是不是如果说这个上面有很多很多限制酶的酶切位点，我就能够将这个金主的 dna 切的很碎啊？如果说我这上面只有几个的话，它是不是切的片就很大？ 所以是不是我就要尽量的让我的 dna 上面的限制酶的识别序列要多？那如何才能多呢？我的识别的序列越短， 在金属 dna 上出现识别位点的可能性就越大呀。比如某个限制酶的识别序列是 a a a a， 那 出现这个序列的概率是不是就是四分之一的四次方？有八个的话， 是不是就是要需要四分之一的八次方啊？所以你看，很明显它越短，它的概率越高，对不对？ 所以我们应该是四个剪辑队。接着往下看，首先需要将图乙的片段什么才可以利用 p 一 和 p 二扩增未知序列？那这里考的其实就是一个知识点，叫做反向 pcr。 反向 pcr 的 目的就是通过已知序列扩增未知序列。它的流程是这样的， 比如这是一段 dna 序列，中间这段 dna 序列是我已知的，那我现在要想知道左边这两侧未知的序列长什么样子？ 由于我这两侧都是用同一种限制酶切割的，是不是？你看这里，他就是用同一种识别四个剪辑队的限制酶进行随机的切割，是不是？所以这两端的末端他是相同的，他就可以成环，是不是？成环之后我再设计一对引物，这对引物长这个样子， 左边这堆引物像这样进行扩增，右边这堆引物像这样进行扩增，那它是不是就也可以这样转转转？同理，这这边也是将我们的未知的这些黑色的部分 全部给它扩增出来啊，对不对？是不是就通过了已知序列，将未知的序列通过 p、 c、 l 的 方式扩增出来了？所以这里我们这一步应该是什么？ 你的片段要先成环嘛，对不对？要先环化，才能利用引物一和引物二进行扩增。 p、 c、 r。 扩增出未知序列之后，进行了一系列的电容操作，其中可以判断出两条，第一片段未知序列是否处于同一个基因组的操作序列位。它给了两个选项，琼脂糖凝胶电泳或者是侧序和序列比对。 琼脂糖凝胶电泳，它只能干嘛？它是不是只能判断大小啊？但是你不知道序列，所以你不知道它是不是同一个基因的嘛？ 是不是？所以你要通过测序和距离比对，你才知道它是否属于同一个基因的吗？ ok， 接着往下看。通过龙杆菌转化法将构建的含有野生型基因的表达指令转入图片之中，如果检测到野生型基因，能不能确定该植入的表型为阳性？ 也就是说我现在已经将这个含有野生型的表达载体已经导入这个植入了，然后我同时我还检测到它确实已经导入进去了，那我能不能确定它的表型就是野生型了呢？ 肯定是不行的嘛，对不对？你现在只能是检测它已经导入进去了，那你这个基因能不能在这个植入体内正常的发挥功能？我是不是现在也不知道？我还通过也是课本上提到的个体生物学水平的检测啊。 ok， 那 这就是这一道题目，这道题目考的就是非常综合。你看我们再来总结一下，首先第一个控 考的是什么？我们指令上面的一些重要结构和它对应的功能对不对？第二个控考了什么？这控考的是不是限制酶的选择？ 然后第二问是不是还考了我们的反向 p、 c、 r？ 然后最后一问，是不是还考了我们的基因工程的最后一步叫做目的基因的检测与鉴定，是不是？所以它考的是非常综合的哈。但是这些题目它难吗？ 他不难，你只需要将这个过程搞清楚就可以了。如果谁搞不清楚，你就干啥就画图，你看画个图，他其实就是非常清晰明了了，是不是？有没有感觉了？那我们这期的视频就到这里，下期视频我们接着讲，二零二四年的山东省高考技能加这题，下期视频再见。拜拜。