CCK8全流程教学（视频版～～） 哈喽宝子们我是盛夏学姐今天带大家来学习一下CCK8的计数、铺板全流程知识点+技巧吧 🌟🌟实验物品铺好板的细胞、1ml移液枪、100ul移液枪、10ul移液枪、完培、PBS、胰酶、96孔板、细胞计数板（⚠️⚠️学姐此次选择的移液枪是吉尔森的移液枪） 🌟🌟实验步骤1.将细胞从孵箱内取出，弃培养基，此环节使用1ml移液枪；2.pbs清洗一遍，加入1ml胰酶，此环节使用1ml移液枪；3.细胞放入孵箱消化，3min；4.以1:3（胰酶：完培）终止胰酶，细胞一定要多次吹打混匀，但用力不能太大；若吹打不够，细胞易成团，细胞吹打过度，细胞会破碎，导致测量OD值不准。吉尔森的移液枪吸力适当，吹打以后，细胞单个悬浮，见后面的铺板完成的图片；5.800r，5min，离心；6.离心后取出一个新的ep管记为“100”，装有细胞的ep管记为原液，分别向两个离心管内加入1ml完培；吹打混匀原液管，取出100ul加入“100”管，方便后期反推细胞数的悬液体积；7.准备10ul移液枪，对“100”管取出10ul进行细胞计数，具体方法见视频；8.计数完以后，确定所需细胞数的对应原液体积后，开始铺板；9.将96孔板边缘孔加入100ul pbs，防止测量途中药物及完培挥发；10.取出一个全新的ep管，加入计算好的完培（100ul/孔），从原液取出计算好对应孔数的总悬液体积，去除吉尔森的100ul移液枪，开始铺板；11.每5个孔对此吹打以后，再进行铺板，铺板时移液枪打至一档即可，最好不要吸一打二，视频最后大家可以看到随机观察孔的细胞密度是相近的。（⚠️⚠️移液枪是否准确也会影响细胞铺板是否均匀，因为某些移液枪吸一打一以后会有部分残留，吉尔森的移液枪弃上清后，ep管内上清残留少；上清打出后枪头内残留也少，量程准确度较高） 大家学会了吗？评论区继续讨论和答疑👇👇#科研日常 #细胞实验 #科研大吉#CCK8实验 #超吉移液器
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发布时间：2025-04-03 22:13全部评论
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