①蛋白变性煮蛋白的目的是使蛋白质变性，破坏其天然的三维结构:由多种非共价键，如氢键、疏水离子键，形成的复杂结构)，使其线性化。这样可以使蛋白质更容易与SDS(十二烷基硫酸钠)结合，从而在后续的电泳过程中按分子量大小分离。②SDS结合SDS是一种阴离子去污剂，能够与变性的蛋白质结合，形成带负电的复合物。煮蛋白可以确保SDS均匀地结合到蛋白质上，使所有蛋白质的电荷密度一致(电荷与质量比相同)，从而在电泳时仅按分子量大小分离。③还原二硫键煮蛋白通常会在含有还原剂(如B-基乙醇或DTT)的缓冲液中进行。这些还原剂可以断裂蛋白质中的二硫键(-S-S-)，进一步确保蛋白质完全展开，避免因二硫键导致的蛋白质聚集或异常迁移。④防止蛋白降解高温煮沸可以灭活样品中可能存在的蛋白酶，防止蛋白质在后续步骤中被降解。⑤提高上样均一性煮蛋白后，蛋白质会均匀分散在样品缓冲液中，避免因蛋白质聚集或沉淀导致的上样不均一性。#蛋白质变性 #WB #SDS #二硫键 #科研
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发布时间：2025-07-30 09:01全部评论
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