超净台实验室操作|基础型恒温扩增试剂准备及其操作 内含：基础型扩增方法一：酚氯仿抽提法！1.实验前，将所有液体试剂平衡至室温融化，否则会影响扩增效率。2.将安普未来生物的基础型恒温扩增试剂盒内的：A buffer（稳定蛋白/酶，性能的缓冲体系）B buffer（镁离子等激活体系）；菌水、上下游引物，充分振荡混匀、瞬离。3.取出适量干粉试剂，并做好标记，不然会混乱测试内容。4.一次向每个反应试剂内加入29.4微升的A buffer，8.5微升的无菌水，上下游引物各2微升，盖上管盖，观察复溶状态。注意：因为A buffer的液体较为粘稠，移液枪手势需要慢慢吸取快点打出。5.将准备好的试剂，连同B buffer一起放入传递窗内，转移至样本间。（在标准实验室中，不用实验室处理不同的操作步骤，避免污染）6.从传递窗取出，转移至样本间的生物安全柜中，等待加样。7.取出准备好的核酸样本、B buffer，振荡混匀，瞬离备用。注意：离心机需要配平，比如对称摆放重量一致的离心管。8.一次向试剂内加入5微升的样本核酸，2.5微升的B buffer加在管盖上；（因为B buffer是启动剂，直接加入管中，容易过早扩增，影响结果）9.将试剂转移至分析间，从传递窗取出试剂，上下颠倒混匀8次，瞬离。10.金属浴38℃孵育20min。 琼脂糖凝胶电泳法显示结果：酚氯仿抽提法1.取出酚氯仿抽提液2.吸取瓶子下层的抽提液50微升，加入到扩增产物试剂中。3.上下颠倒混匀8次，再放入1.2万转离心机中，离心5分钟。4.上一视频中冷却好的凝胶，拔出梳子，将凝胶放入电泳槽内。5.取出2微升的6×上样缓冲液，滴在一次性手套上。6.扩增产物离心完后，取出检查离心状态。（会分三层：上清液、变性蛋白、下层抽提液）7.吸取5微升上清液与2微升6×上样缓冲液，抽吸混匀。8.吸取5微升混合液滴在加样孔（琼脂糖凝胶）中，同时滴加Maker。9.等待启动电泳。#琼脂糖凝胶电泳 #实验室日常 #核酸检测
酚氯仿法提取dna流程有实验装置
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发布时间：2025-05-23 18:19
