细胞传代培养一般离心多长时间

今日分享细胞传代培养实验。从培养箱中取出的培养敏放置于生物安全柜中。打开培养敏，将培养敏的钙过火消毒，插上枪头，吸走培养敏中的肺液。 此时可以将培养米倾斜，以便吸走肺液。吸完肺液后将枪头丢弃， 这里可以用一页枪吸走，也可以用便携式的换页器来把它吸走。下一步用 pbs 清洗， 拿取 pbs， 将它从酒精喷上，过火消毒，而后打开瓶盖，瓶盖和瓶管的口部分也要过火消毒。插取枪头， 用一夜枪吸取两到三毫升的 p b s 加入到培养米中清洗。 注意，用一页枪将 p b s。 打入的时候，要打在培养敏的臂上，而不应该打在培养敏的底部，那样会冲散细胞，一般冲洗两次即可。如果觉得培养敏内较脏，可以冲洗三次。 用完的成装器去成装液体的管子都要过毒消毒。过火消毒管口可以晃动一下培养敏，使他充分清洗，而后将其洗过的废液吸走。 重复以上的 p b s。 清洗一次。 将用完的 p b s 过火消毒，瓶盖也要过火消毒，而后将其拧紧，再过火消毒一遍。毒对于细胞培养的是非常重要的，这样可以避免污染。 当肺液吸走， p b s。 清洗这一步已经完成，接下来要进行一 用一枚消化。我们是新分装到离心管中的一枚，因此要先用记号笔在瓶身进行标记，写清分装的液体名称以及分装的日期，同时可以在盖上写一下，这样方便查寻找。 下面将盛装一枚的离心管过火消毒打开。同样的过火消毒 瓶盖和瓶口都要进行消毒，一般是开盖后将瓶盖消毒之后再放置在抄镜台上，这里漏了一步一页枪插取上枪头，吸取一枚 加入到培养机中，此时可以直接打入培养机中。哎，移煤就是消化细胞使其打散的，一般一个培养机加入二到三毫升的移煤即可，视情况而定。 加入移煤之后，将盛取移煤的离心管管口过火消毒，瓶盖也同样过火消毒，之后将其拧紧。再次过火消毒 之后，要将瓶培养敏盖上进行消化，这时可以从右往左依次盖上，并且 盖上之前培养敏的盖子要过火消毒。将培养敏盖好后，可以用左手握好培养敏，右手进行拍打，促进其消化。拍打的小技巧是右手的手腕不要动，手掌来回拍。 等待移煤消化的过程中，可以先把即将要用的新培养米取出。注意，取培养米也要在生物安全柜内操作，并且最好要将培养米挤出，而不是直接伸手去拿，这样可以避免污染 剩下的培养米。那个袋口用橡皮筋封紧，防止污染。此时将一枚作用的细胞已经消化的差不多，将其放在显微镜下观察消化的 是否完全。将培养米放在显微镜下观察，如果观察消化的不够完全，可以将细胞培养米放在手中，用上述讲到的方法继续拍打，促进其消化，观察到有大量细胞呈流动状就可以了。 将培养米拿回抄镜台上，打开培养米瓶盖同样要过火消毒，下面要加入培养机，中止移酶的消化。 无论打开什么样的盛装液体的容器，都要先过火消毒，而后将瓶口以及瓶盖过火消毒。插取枪头，从大瓶的培养机中吸取两毫升的培养机加入培养敏中。这里 加入的，嗯，培养肌的体积是根据前面加入的胰酶的体积决定的，两者是相同的。我们前面加入的是每个培养敏加入了两毫升胰酶，因此在这里每个培养敏要加入两毫升的培养肌。中止消化， 用完之后同样要过火消毒。先扣好，可以稍微晃动一下培养机，使其混合均匀。 接下来要将消化过的细胞收集到一个新的离心管中，已备离心。拿出一个新的离心管，过火消毒，倾斜培养敏， 将其吹打，使其混合均匀。然后可以向细胞米培养米的上面清洗一下，以备以 要求以球收集到更多的细胞，吹打混匀均匀。吹打混匀充分之后，将细胞吸取到离心管之中即可。 因为两个培养品中都是一样的细胞，因此可以吸到一管离心管中进行离心，而后进行其他的处理。 同样的，另一培养米中消化好的细胞也进行充分的吹打混匀，而后将它吸入到离心管。吸取好的离心管过火消毒，将盖子也消毒，将它扣紧，再消过火消毒一遍。 把之前的培养机盖好扔到垃圾桶里。收集好的细胞放入离心机进行离心，要注意配平哦， 是一千转，每秒三到五分钟。带离心的过程中，将下面要用到的新培养机打开盖，并且一个可以利用这段时间加入新的培养机。一般每个培养机我们是加入七到八毫 生的一个培养品，加入七到八毫升的培养机，用完后也是要将培养机的盛装，培养机的瓶口和瓶盖进行消毒， 更合理的布局可以减少操作过程中的污染，并且让操作过程中更加方便。 因为操作完距离离心结束还有一段时间，因此先将培养敏的盖子消毒盖好，以防污染。盖好之后，若还有时间，可以拿取记号笔 进行培养米的标记，一般需要标记三个信息，第一行写明培养的细胞名称，第二行写好培养人的名字，第三行第三行写好处理的日期，待离心机降速完成。取出离心管，可以观察到离心管底部有一群细胞， 接下来要将离心管中的上青叶吸走。同样的进行操作前将离心管的瓶口过火消毒，这里一定要注意 枪头的后半部分一定不要吸深入离心管内，可以将它保持一个角度同时倾斜，这样里面的上倾都会被吸走，而不会产生污染。 吸走后缓慢的移出枪头，尽量不要碰到管壁以及管口。 接下来要像刚才只剩细胞的离心管中加入培养机，已进行平分，如果要分为六个米的话，就加入六毫升的培养机，我们就是要分成六个米，所以加入六毫升的培养机于离心管中 做完之后，同样要将离心管的管口进行过火消毒，接下来不会再用到培养机，因此将培养机的瓶口过火消毒，将瓶盖也过火消毒，将瓶口拧紧过火消毒， 注意晃动的幅度不要太大，尽量不要让培养机碰壁碰到比较脏的瓶口。接下来要用一夜枪吹打，以便把里边 的细胞团吹散。这里的小技巧是每次的时候慢吸快打，保持一定节奏，并且吸取的时候吸取四分之三，打的时候不要全打出去，这样不容易产生气泡。 一般吹打三十次，要将培养敏打开，把六毫升的细胞分平分在六个培养敏中，这时候将枪头，将枪一夜枪放到一边，或者是将枪头打掉一会，可以换一个新的枪头。 杨敏的盖子依次打开，一般是从左向右打开，这样不会污染到已经打开的培养敏。将离心管过火消毒，然后再吹打几次，使里面的细胞混合均匀，同时他的分布也是均匀的，这样分到培养敏里。呃， 细胞的密度大致是相同的，大概吹打几次后，用一夜枪吸取一毫升的细胞加入到培养敏中以后下后面的五个敏也依次吸取一毫升加入， 插入的时候也可以按照从左向右的顺序，这样可以减少屏上方操作带来的污染。培养敏的盖过火消毒，盖好培养敏，此时呃也要按照从 此时要按照从右往左的方向依次盖上，这样你在操作的时候就是经过的是盖上的培养米就不会污染到他。这里的示范是错误的，操作是多次的过火消毒，可以创造更干净的环境啊。培养 杨敏盖好之后，可以将他们摞起来，接下来要晃动培养米，使细胞的分布更加均匀。 晃动的小技巧是一小技巧是一定要呃按，双手按住培养米，然后上下左右十字划晃动，晃动十次左右，一般就会混匀 后，将培养米拿到显微镜下观察观察是否混匀以及细胞分布的密度，以及要注意观察培养米内的培养机是否有污染等异常情况。 观察没有问题后，将处理好的培养米放入培养箱中，放入之前可以再晃动几次。以上 就是细胞传带的全部过程，做完实验后记得清洁桌面，带走垃圾，关闭显微镜、离心机等机器，有必要时可以开启紫外线进行室内以及生物安全柜的消毒。谢谢，再见。

带大家体验一下细胞传带的过程，点酒精灯，拿酒精莲擦桌子，拿出自己需要的试剂，把细胞培养瓶中的液体倒掉，加入二毫升 pbs 体，轻微摇晃它， 把液体倒掉，通过 pbs 来清洗一下残留的培养机，把残留的 pbs 吸出来。第二步，加入乙镁，摇一摇，然后把它放入培养箱中，倒计时三分钟。 然后开始加细胞培养机中和一枚中指消化，用一夜枪轻轻吹打，把贴壁细胞吹打下来， 加到离心管里面，离心离心，七分钟离心后就变成了这样子，倒掉上青叶，加入培养机， 吸出二十微生道细胞培养瓶中盖上，放入培养箱中培养细胞，这就 ok 了。

这期视频我们分享贴壁细胞传带的标准操作实验操作前我们先准备所需的培养机，胰酶 p b s 离心管、 t 二五培养瓶以及无菌枪头等，注意是继续提前预热。接下来我们进行认习步骤， 先抽走培养瓶内培养机，然后加五毫升 p b s。 润洗一到二遍，清除残留的完全培养机， 我们加这个培养机，还有加这个 pps 啊移煤。这种时候我们要稍微注意一下， 注意一下这个瓶口，有时候这个瓶口他容易残留，有一点那种降低可能附着都有一些细胞在上面，所以这个枪口稍微离这个瓶口稍微远一点。 润洗完成后，我们进行消化步骤，这个一枚我们要把一枚，然后加到这个跳舞里面去。我们先在 t 二五瓶内加一毫升一枚， 上下左右摇晃铺匀后放置在三十七摄氏度培养箱中进行消化， 就消化到这种边缘开始脱落了，然后中间但是还没完全脱落的时候就可以了， 对消化时间把握不大，可以每隔三十秒左右即吸取瓶内一枚，轻轻吹打一下，若细胞可以很轻松吹下， 即可终止消化，若不能则继续消化。三十秒左右 消化完成后，立即加三到四倍仪没量的完全培养机终止消化， 然后用一夜气吸取瓶内培养机吹落贴壁的细胞，注意控制吹打力度，吹打过程勿产生过多气泡。 之后将 t 二五屏内细胞旋液转移至离心管中，进行三分钟离心收集细胞转速为一千转美分。 在离心的同时，我们分别在两个 t 二五培养瓶内加十毫升培养机， 离心完成后，仙气离心管内上倾， 然后加五毫升 p、 b、 s 轻轻重旋细胞进行润洗， 吹打个十来下就可以了，就给上面的沉淀先给他吹起来，然后再给他吹散， 之后再进行三分钟离心，转速为一千转每分， 离心完成后，气离心管内上氢，然后加二毫升锌，培养机轻轻重旋吹散细胞， 再在培养瓶内接种一毫升细胞血液， 轻轻混匀后，就可以将细胞放入培养箱中继续培养啦。

人单核细胞白血病细胞 t h p one 从一名一岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立，可受佛波指 t p a 诱导向单核细方向分化，可用于三 d 细胞培养、免疫系统紊乱 免疫学和独立学研究，也是一种合适的转染宿主。 t h p one 为悬浮细胞，在三十七摄氏度和百分之五二氧化碳环境下生长，使用二 p m i 幺六四零培养机培养，并添加百分之十胎牛血氢、 零点零五毫摩尔贝塔球机乙醇和百分之一双抗。你也可以购买商品化的完全培养机，更方便。幺氧号 t h p one 细胞必须了解它的这些生长特性。一、 t h p one 细胞悬浮圆形生长，偶有小剧团，属于正常现象，无需吹散少量 细胞附着瓶底也属于正常现象，可将悬浮细胞转移至新培养瓶，丢弃贴壁的细胞。二、 thp one 细胞喜欢偏酸环境，培养机成橘色时可不用换液，补充适量新鲜培养机维持一天再进行换液。三、 php one 细胞有密度依赖性，密度低时生长较慢，培养密度维持在三十万至一百万细胞每毫升之间为宜，超过八十万细胞每毫升即可传代， 不建议超过一百万细胞每毫升。四、贝特囚基乙醇可以消除活性氧、自由基，维持细胞高密度生长对 thp one 细胞是必要的。若培养机中不添加贝特囚基乙醇， 长期培养细胞可能会出现大量贴壁、严重剧团等情况。五、 t h p one 细胞复苏后恢复较慢，建议复苏后四十八小时内不对细胞进 行操作。另外，小尚再教大家几个培养 thp one 细胞的小技巧，一、将培养瓶竖立放置，瓶盖朝上，这样可增加细胞局部密度，促进 thp one 细胞的增值。二、推荐使用半换液法进行换液，每四十八小时半换液一次，每七天离心换液一次， 减少离心对细胞的损伤，细胞状态会更好哦。具体的细胞收获、幻夜传代、 动存与复苏。详细操作步骤请在小上主页视频列表查找，如果本视频对你有帮助，记得点赞、转发、订阅哦，我们下期再见！