平板划线法和分区划线法步骤

直接用枪头划线你会吗？插上十微升的枪头，吸取一微升菌液 滴在平板上方，用舒适的姿势握紧枪头，对着菌液左右小范围划开，紧接着 z 走自划线，一区划好后需要换掉枪头，再进行二三四区划线。

让复杂的生物变得清晰可见，这里是如月生物课堂，救命！平板划线法居然这么简单！灭菌划线判污染考点一次拿捏！今天我们进入选择性 必修三第一章第二节微生物的培养技术及应用。我们一起来学习这节课的一个知识点，平板划线法，它这在微生物纯培养过程中的一种方法。那先说什么叫培养物， 我们先来看什么叫培养物，它指的是在微生物学中将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物群体的 就叫培养物。那就像这个培养敏中长出的多种菌落就是一种培养物，那么由单一个体繁殖所获得的微生物群体就叫纯培养物。像那一个个菌落就是一个纯培养物，那么获得纯培养物的过程就叫纯培养。 那么纯培养这个过程需要经历以下步骤，配置培养机、灭菌接种、分离培养。 我们看微生物的纯培养，最终的结果是要得到由单一个起，就是我们说到的单一 分散的细胞在适宜的固体培养期的表面或者内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的有一定形态结构的子细胞群体，即为菌落。那么菌落的大小、形状以及隆起程度还有一些颜色未有所差异。不同 菌种形成的菌落，这些特征是不一样的，那所以菌落是鉴定菌种的重要依据。比如我们必修二中提到的肺炎链球菌，它们的菌落两种肺炎链球菌的菌落 形态是不太一样的，就像我们说到的有光滑的和粗糙的，即 r 型或 s 型肺炎链除菌，所以说菌落是鉴定菌种的重要依据，我们接着来看，那么如何来会获得单菌落呢？ 就要进行。以酵母菌的纯培养过程为例，来看一下它的原理，其实就是将微生物群通过分散或者稀释成为单个细胞，由单个细胞繁殖 成单个菌落。那么获得单菌落的方法有两个，平板划线法和稀释徒步平板法。下一个视频会讲解稀释徒步平板法， 那么比如说下面这四个平板中这两个，前面这两课就是通过平板画线法最终获得单菌落，就是我们说到酵母菌的纯培养。而后面右面这两个是通过稀释徒步平板法，整个平板上长的都是单菌落。 我们先来看平板画线法获得酵母菌的纯培养物的这个过程。 第一步要配置培养基，然后灭菌进行倒平板，前面呢我们先忽略，那么培养基的灭菌是要用高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌的， 灭菌之后的培养基要倒入培养敏中，当然培养敏可以用干热灭菌杀死所有微生物。那么待培养基要冷却至五十度左右， 在酒精灯火样火焰附近倒平板。这里为什么要强调一个五十摄氏度？因为我们说这里倒平板是要具备固体培养基，固体培养基中是要加了个凝固剂 琼脂的，琼脂在九十八度以上是融化的，但是四十四度以下就要凝固为固体，那么在这里，所以五十度选择这个五十度温度过高容易烫伤，低于五十度那么琼脂会凝固。然后拔出这个 椎心瓶瓶口的棉塞，这棉塞注意不要用手整个握住，防止你首创的微生物污染了这个椎心瓶。 好，然后呢，到平板之前追清屏，要过酒精灯火焰的充分燃烧层进行灼烧灭菌 来防止瓶口微生物污染培养基。接着就可以用另一只手拇指和食指将培养敏打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基大概十到二十毫升倒入培养敏，立即扣上敏盖， 待培养基凝固为固体之后，这个培养即需要倒置放置，无论接种前还是接种后，哎，你比如说接种后的菌体培养的时候放置，培养伤的时候需要倒置培养，如果是 要平板还不用哎，可以放到冰箱里啊，放置的时候也需要平板倒，嗯，要倒置，那为什么要选择倒置？两个原因，这是常考的考点，既可以防止敏盖上水珠落入培养基造成污染。比如我们这个平板上 长了多种菌落，来想一下，假设中间这个橙色的这个菌落 拧盖成水珠，啪落在这个菌落上，那么镇里的菌起就会溅到旁边的两个菌落上，从而造成污染，造成菌落被污染。那么同时也可以防止培养基中的水分过快挥发。 这两个原因好，倒完平板就可以继续后续的接种或分离酵母菌。这里用到的方法叫平板划线法，去分离纯化 微生物的原理是因为通过接种环在固体培养基表面经过连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，经过数次划线后再培养就可以分离得到单菌落了。 这个过程中要用到接种环，这个接种环需要进行灼烧灭菌的，烧至接种环金属丝烧红，然后在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞，同时这个棉塞不要全部握住啊， 然后试管口通过火焰进行灼烧灭菌，杀死试管口的一些微生物。在火焰附近用接种环蘸取一环菌液， 食管口还要通过火焰塞上棉塞，然后呢，在火焰附近将敏盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速深入平板内，划三至五条平行线，盖上敏盖啊，这是第一区划到的三条曲起 平行线，然后就灼烧接种环，待其冷却后，这个一定要冷却之后再进行第二次划线，防止 这个接种环过热，杀死了这些微生物啊。从第一次划线的末端开始做第二次划线，重复以上操作，进行第三区，第四区，第五区的划线。那么在这里我们来分析一下接种环被灼烧灭菌了几次。 在接触菌液之前，接种环先灭菌一次，然后进行第一区的划线 啊，打染要蘸取菌液进行第一区划线，刚开始的时候应该会长出很多，嗯，培养之后会长出菌条啊，好，然后 第一区划完之后，接种环要进行灼烧灭菌，杀死接种环残留的菌种，然后进行第二次划线。第二次划剪要在第一区的末端进行划线，然后开始灼烧灭菌。 接种环好，接着在第二区的末端进行第三区的划线，以此类推。那么我们说到接种环灼烧灭菌后，一定要冷却之后再去接触这些菌种，以免温度过高，杀死菌种。同时我们说到 在这里一共进行了五个区域的划线，那么我们说灼烧灭菌了几次呢？接种环对灼烧了六次， 所以是划线区域的 n 加一次，那么这里就有一个问题，在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧灭菌，目的是什么？以及在划线操作结束后还要进行灼烧灭 菌接种环目的又是什么呢？我们说取菌种钳是为了杀死接种环上所有的微生物，即使这个接种环是放在超近工作台， 也有可能空气中的微生物会腐着在上面，所以取菌菌种钳就要进行灼烧灭菌，一次杀死原美氏上面腐着的一些微生物，那么每次划线钳都要杀死上次划线时残留的菌种， 使得下一次划线的菌种直接是来源于上次划线的末端的，从而使得每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞。那么接种结束后 也要进行一次灼烧灭菌，来杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。那我们说的最后一次的划线能不能与第一次的划线相连呢？耶，这个势欲图其实画的就很清楚，到了第五次的时候，大 钙就可以得到单个细胞了，如果这个时候再与第一次的划线相连，就增加了细菌的数目，达不到纯化的目的。 那么同时我们说在接种时还需要设置一个未接种培养基，与接种后的培养基同时放在相同的培养箱，相同的培养时间，放一个空白培养基，目的是由为了检测你这批培养基有没有被污染以及灭菌是否彻底， 待这个菌液被吸收之后，我们就可以将平板划线后的平板和未结种的平板倒置，放入二十八摄氏度的恒温培养箱，培养二十四到四十八小时，那么经过二十到 二十四到四十八小时，就可以得到这样的平板，这是通过平板划线法分离出的单菌落及酵母菌的纯培养物。那么这个二十八摄氏度也是要根据培养温度啊，也要根据酵母菌种类的不同而稍有差异的。 那如果说在未接种的培养基表面出现了菌落，那说明什么？说明你的培养基被杂菌污染了， 我们要重复做这个实验，重新配置培养机，重新进行无菌操作。那么在接种酵母菌的培养器上，如果你观察到了不同形态的菌落，你本来是要得到酵母菌的纯培养物，但是你看到了不同形态的菌落，那说明 仍然是你的操作可能不够规范啊，无菌操作不规范，或者是你本身储藏的那个菌种就被污染了，不纯，这些原因引起的。好，那么我们要重复这个实验。 好，这是通过平板划线法获得纯培养物的过程。那我们来看，这是二四年湖南高考题啊，一个选择题改编，这是八种操作，八个操作啊，哪一个？哪些是存在问题的？ 以及他的原因是什么？第一个要灼烧接茧环，应该是正确的吧，利用的是酒精灯呢，酒精灯的充分燃烧层。二，冷却接茧环，拔出棉塞，使管棉塞，但是这里专门写了一个完全握住棉塞 跟四区别，握住棉塞上部四更规范二不规范二可能会造成什么呢？ 棉塞如果全部握住会造成杂菌污染，应该只握住棉塞上部，所以四是正确的。二不对，那么士官口是要通过火焰进行灼烧灭菌，防止哎呀，我们说到的空气中的或者说其他部位的 一些微生物污染，这个菌种好三和四正确。再看五、士官口通过火焰并塞上棉塞五也正确， 蘸取了菌液之后还要我们说到的塞上棉塞士管口还要通过火焰好。六、接种环要划线操作了， 但是他怎样把敏盖敏底直接分离了，这个时候划线的时候不能将培养敏完全打开，应该在火焰附近将培养敏打开一条缝隙， 然后用接种环在培养基表面迅速画三至五条平行线，然后盖上免盖。七、错误还是很明显的。八、接种环我们说 最后一次画线不能与第一次画线相连，不然无法达到纯画的目的。八错在哪里？ 对平板需要倒置培养两个，一个是防止敏盖上的水珠落在培养敏，造成污染，第二就是防止水分过快挥发。好，我们这节课就说到这，下节课马上要讲到徒步平板法。

平板划线法全攻略来了！平板划线法的主要目的是从混合菌群中分离出纯培养物，并获得独立分布的菌落，以便进一步研究和增值细菌。利用接种环在固体培养基表面连续划线，通过物理稀释将微生物群体分散。 第一区划线，接种环站取样品，在培养基边缘密集划线，使微生物均匀分布。后续各区划线，从上一区末端取菌，依次在新区划线，逐步减少微生物数量，最终在最后一区形成单菌落。第一区划线所需材料与事迹如下， 下面是三种问题与解决方法，可以截图保存哦！

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家人们，在微生物培养中，平板划线法和稀释徒步平板法是常用的两种方法，但很多人容易把它们搞混，今天我就来给大家好好区分一下这两种方法。核心区别主要体现在三个方面，首先是目的不同。 平板划线法主要是用来分离纯化菌种的，属于定性操作。而稀释徒步平板法不仅能分离纯化菌种，还可以对活菌进行计数，属于定量操作。这就好比我们挑选水果， 平板画线法是把不同种类水果分开，而稀释徒步平板法不仅能分开，还能数数每种水果有多少，操作上也有很大差异。平板画线法是用接种环直接在平板表面连续画线，两人通过这种方式对菌种进行稀释，而稀释徒步平板法得先对菌液进 行梯度稀释，然后用徒步器把稀释后的菌液均匀涂抹在平板上。这就像画画，平板画线法是一笔一笔画， 而稀释徒步平板法是先调好颜料浓度再铺开画，结果也不一样，平板画线法得到的均落分布不均匀，没办法进行计数，而稀释徒步平板法的均落分布均匀，可以准确的进行计数。 再说说他们的优缺点，平板画线法操作简单又快速，不过缺点就是不能计数。稀释徒步平板法功能更全面，能计数但操作比较繁琐。 虽然他们有区别，但也有共同点，两者都要在固体培养基上进行无菌操作，最终都能获得单菌落，来实现微生物的纯培养。 家人们，现在你们对这两种方法是不是更清楚了？在实际应用中，你们觉得什么时候用平板划线法更合适？什么时候用稀释徒步平板法更好呢？

首先第一种是直线的画法，我们在屏幕上随便画一条线，按住不动就生成一条直线，我们点击屏幕就可以生成一条平行于画布的直线。第二种弧线画法，首先我们画一条有弧度的线，按住不动，他就成了弧线，在上面编辑弧形，这里点击之后出现了三个小点， 可以随意调节弧线的弯度以及弧线的长度。第三种方法是虚线的画法，先我们在画布上画一条短线，按住不动， 然后拖动就可以得到虚线，按住屏幕就可以画一条平行于画布的虚线。第四种画法是椭圆画法，我们在屏幕上任意画一个椭圆，按住不动，它就成了一个正椭圆。当然了也可以进行编辑椭圆， 然后看到它有四个小点，也是可以去调节它的形状大小，也可以进行旋转。下一种画法是圆形的画法，首先我们在屏幕上画一个圆， 然后我们按住它就会变成一个正圆。下一种方法是矩形的画法，我们在屏幕上任意画一个三角形，按住屏幕不动，就可以生成一个正三角，我们再画一个正方形， 按住屏幕不动，他也成了一个非常标准的正方。同理，我们借着画一个长方形，按住屏幕不动，就会生成一个长方形。最后一种画法是多边形，我们画几条短线，将它连接在一起，就会生成多边形，当然这多边形也可以进行编辑，然后 在他的这几个小点中，我们也可以调节任意一边的长短大小。今天的基础操作你学会了吗？学会，点赞哦！