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原核表达的原理蛋白质表达技术:将基因插入合适载体后导入宿主细胞用于表达大量蛋白质的方法。应用于蛋白质纯化、定位,蛋白质的结构域分析及蛋白质的体外功能分析等方面。原核表达系统:将外源基因导入原核细胞并使其表达蛋白质的技术。分为大肠杆菌表达系统,芽孢杆菌表达系统,链霉菌表达系统。步骤1.载体构建:把目的基因插入合适的原核表达载体,载体含启动子、终止子、复制原点等元件。启动子驱动基因转录,如常用的T7启动子。2.转化宿主菌:将重组载体导入原核宿主菌,如大肠杆菌。常用化学转化法或电转化法增加细菌细胞壁通透性,使载体进入。3.转录:宿主菌RNA聚合酶识别载体启动子,结合后启动目的基因转录,合成mRNA。4.翻译:mRNA与核糖体结合,tRNA携带氨基酸按密码子顺序合成多肽链,经折叠加工成有功能的蛋白质。5.诱导表达:添加诱导剂让目的基因高效表达,如IPTG可诱导含lac启动子载体的基因表达。优点我们常采用大肠杆菌表达系统,主要因为它的八大优势: 1.遗传背景清楚2.目的基因表达水平高3.培养周期短4.抗污染能力强5.更易于生长和控制6.实验技术相对简单7.成本廉价8.有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具有各种特性的质粒可供选择#干货分享 #知识分享 #生物实验室 #每天跟我涨知识 #科普一下
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