00:00 / 05:36
连播
清屏
智能
倍速
点赞1112
00:00 / 05:32
连播
清屏
智能
倍速
点赞1837
00:00 / 21:23
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
00:00 / 00:34
连播
清屏
智能
倍速
点赞188
00:00 / 03:06
连播
清屏
智能
倍速
点赞5
00:00 / 04:08
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
00:00 / 01:34
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
00:00 / 02:20
连播
清屏
智能
倍速
点赞68
00:00 / 04:08
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
00:00 / 02:11
连播
清屏
智能
倍速
点赞0
00:00 / 01:05
连播
清屏
智能
倍速
点赞17
00:00 / 06:43
连播
清屏
智能
倍速
点赞35
大多数实验室用的探头式超声波细胞破碎仪的额定功率在200W 到 600W 这个区间。但需要注意的是,仪器上设置的功率(例如50%)是最大输出功率的百分比,而真正作用于样品的功率(能量) 还取决于探头振幅、样品体积、浓度和粘度等。 1、影响功率选择的关键因素 ①菌体类型: 一般来说蛋白纯化使用的如大肠杆菌细胞壁相对较薄,容易破碎。通常使用中等功率(例如200-300W) 即可。 酵母菌、真菌:细胞壁非常坚韧(含有几丁质等),是最难破碎的。通常需要最高功率(600W以上),并结合更长的处理时间或使用专门的破碎珠。 ②样品体积和浓度: 体积:通常建议每次处理的体积在1 mL到200 mL之间。体积太小,探头无法充分浸入;体积太大,能量分散,效率低下。 浓度:菌悬液浓度通常控制在 OD600 ≈ 10-50(湿菌体重约10%-20%)。浓度过高会过于粘稠,能量难以传递,且容易过热;浓度过低则效率低。 ③仪器和探头: 探头尺寸:必须根据样品体积选择合适的探头 tip。小样品用大探头会带入过多能量并产生过多泡沫;大样品用小探头则效率低下。探头尺寸与功率匹配至关重要。 2、标准操作流程和建议参数(以普通大肠杆菌为例) ①样品准备: 离心收获菌体,用合适的缓冲液(如PBS或裂解缓冲液)重悬,并置于冰水浴中。(超声波破碎会产生大量热量,必须全程冰浴冷却) ②参数设置: 功率/振幅:设置为仪器最大功率的 30% - 60%(例如,一台600W的仪器,设置到180W-360W的实际输出)。原则:先从低功率开始尝试。 工作模式:必须使用间歇模式,即“工作几秒,暂停几秒”。这有助于散热,防止蛋白变性。 ③操作过程:将探头浸入样品液面下至少1-2 cm,不要太深也不要太浅,以免产生过多泡沫或飞溅。 破碎一段时间后,取少量样品检测破碎效果(如涂片镜检观察完整细胞数量,完整细胞越多,说明破碎越不充分。或测可溶性蛋白浓度,当蛋白浓度不再随破碎时间增加而升高时,说明已达到平台期)。注意应避免过度破碎,因为过长的破碎时间或过高的功率会产生局部高温和自由基,导致目标蛋白变性、失活和降解。 #蛋白纯化 #超声波破碎菌体 #超声波细胞破碎仪 #蛋白变性 #试剂
00:00 / 00:56
连播
清屏
智能
倍速
点赞10
00:00 / 21:28
连播
清屏
智能
倍速
点赞4