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流式细胞术实验过程+上机流程(视频版🔥 流式细胞术(Flow Cytometry)是一种对悬浮在流体中的微小颗粒进行技术和分选的实验方法。可以检测细胞表面或细胞内分子的表达情况、鉴定和分离不同细胞类型等。 今天我们一起来看一下流式细胞术的实验过程+上机流程吧~ ✅制备单细胞悬液 细胞样品可以直接用刮刀刮下来,组织样品需要剪成小块后用活塞研磨,最后通过200目滤网过滤得到单细胞悬液。 ✅流式抗体染色 今天用的是爱博泰克的Mouse T Cells Panel,直接配色一套使用比较方便,T细胞分群结果也很明显。ABclonal是利用SMab®重组兔单抗技术,开发的ABflo®系列全新兔单克隆流式抗体特异性高、灵敏度高、批次间稳定性好,还有极高的信噪比。 ⚠️需要注意流式上机时设置blank组、单阳组和FMO对照。 Blank就是空白对照或未染色细胞组(不加抗体染色)。 单阳管即单染对照,单阳管可以用细胞,也可以用补偿微球,但是不能混合一管染,细胞也最好是跟样本接近的类型,不要两种相差很大的细胞混合在一起做,如药物处理和未处理的细胞混合做单染 FMO对照(荧光扣除对照,抗体减一对照),建议低表达或连续表达的靶点设置该对照 ✅上机流程 执行完开机流程后,依次上阴性管、单阳管和FMO管,按照文献或者爱博泰克抗体说明书的图圈门和调补偿(防止不同抗体串光)。之后检测实验组即可~ 🔥注意:全程在冰上进行,抗体染色及之后步骤需要避光 #poppy的科研生活 #细胞实验 #流式细胞术 #爱博泰克 #ABclonal
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