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大分子and小分子蛋白跑wb的综合优化方案🧫主包做170kd和10kd的蛋白,分享下经验叭~ (图中条带一抗来源均为Abmart) 1、样品制备: 🌟大分子: 用温和裂解液,例如ripa(中)、coip裂解液; 很多大分子是膜蛋白,可做温度梯度进行变性,选择合适温度 我做的大分子变性条件:70度,10分钟 🌟小分子: 可用强裂解液,例如SDS裂解液、ripa(强) 大部分变性条件:100度,5分钟 ➡️裂解液越温和溶解性越差,根据待测靶蛋白选合适的 ➡️保证10ul体系有20~30ug蛋白 2、凝胶体系(图2) 特别大的大分子可选择Tris-Acetate凝胶试剂盒,会比普通的效果好些,200kd左右的用普通配胶试剂即可 大分子:6-7.5%胶 小分子:12-15%胶 3、跑胶(图3图4) 🌟大分子: 把上面条带尽可能跑开,跑胶时间延长,低电压跑(100v),跑胶时间长可在冰水浴中进行,把下面的loading带跑出去,可选择略大分子内参:例如Hsp90,就能一起转膜 🌟小分子: 把下面的条带跑开即可停止,电泳时间缩短,电压可为130v,一般跑到胶的2/3处即可,不要跑到最下面,可选内参:GAPDH,actin等… 4、转膜(图5) 大分子:0.45um pvdf膜 (200kd以内也可用0.22um的,亲测没影响) 小分子:0.22um pvdf膜 转膜条件: 大分子200kd: 恒压90v 或 恒流300mA 2.5h 小分子10~20kd: 恒压90v或 恒流300mA 20~30min,如果有30~50kd的内参一起转,可转45min 采用冰水混合物,湿转法(尤其大分子),效果更好,个人感觉大分子转膜:采用传统转膜液比快转好很多,配方在图7,可用乙醇代替甲醇 比较需要注意的就是这几方面❗️ 从封闭到一二抗孵育没啥差别,一抗的选择也很重要~ Abmart家的一抗是本人一直在用的!好几个指标都用过,效果都挺理想的嘿嘿😈 例如…细胞自噬Parkin,凋亡Bax,bcl2 ,焦亡GSDMD,炎症小体nlrp3等…图6指标为Bax #科研日常#wb实验#WB实验 #研究生#研究生日常
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水解酸化池与厌氧池有什么区别 反应过程不同: 水解酸化池:仅进行水解和酸化,水解是大分子有机物分解为小分子有机物;酸化是进一步将小分子有机物转化为挥发性脂肪酸。 厌氧池:包含水解、酸化、产乙酸、产甲烷四个阶段,最终实现高浓度C O D降解,并生成甲烷和二氧化碳。‌ 应用目的不同: 水解酸化池:主要是提升废水的可生化性。‌ 厌氧池:直接降解高浓度机物,C O D去除率可达70%-90%。‌ 微生物菌群不同:。 水解酸化池:以水解菌和酸化菌为主,繁殖快、适应性强。‌ 厌氧池:既有水解菌和酸化菌,还有产甲烷菌。‌ 运行参数不同: 停留时间:水解酸化池,2h;厌氧池6-8h,最高可达24h ORP:水解酸化池控制在+50mV以下,厌氧池≤-300mV。‌ pH值:水解酸化池为4-9,厌氧池为6.8-7.2。‌ 温度:水解酸化池可常温运行,厌氧池必须在中温(30-35℃)或高温(50-55℃)下运行。‌ C O D去除率:水解酸化池只有20%-30%,厌氧池可达70%-90%。‌‌ 适用范围不同: 水解酸化池:适用于低浓度、难降解废水的预处理,多用于工业废水处理 厌氧池:适合高浓度有机废水的前处理,多用于食品加工废水处理 #污水处理设备 #污水处理 #污水处理设备厂家 #污水处理设备源头厂家 #污水处理设备一体机 #
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