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精准检测“善变”的细胞信使:TGF-β1 转化生长因子-β1(TGF-β1)是调控细胞生长、分化、免疫和纤维化的关键细胞因子,但其在ELISA检测中素有“棘手”之名。因其通常以潜伏形式存在,且容易吸附在容器壁上,导致结果不准。本攻略将详解TGF-β1 ELISA的核心要点,助您获得可靠数据。 一、 TGF-β1的特殊性:为什么你的检测总是不理想? 与大多数细胞因子不同,TGF-β1的检测面临两大核心挑战: 潜伏态 vs. 活化态: 潜伏态复合物:大多数TGF-β1与LAP(潜伏相关肽)非共价结合,形成潜伏态复合物(LLC),无法被常规ELISA抗体识别。 活化态:只有从LAP中释放出来的游离TGF-β1才能被检测到。 高粘附性:TGF-β1蛋白极易吸附在试管、枪头等塑料表面,造成样本损失。 因此,样本的前处理是TGF-β1 ELISA成功与否的绝对关键! 二、 实验流程核心:样本前处理(酸激活法) 对于细胞上清、血清、血浆等样本,通常需要酸激活 将潜伏态TGF-β1转化为可检测的活化形式。其核心流程如下,其中“酸激活”是区别于常规ELISA的最关键步骤: (一)、样本采集 “关键步骤: 酸激活 加入1N HCL震荡混匀” 室温孵育10-15分钟 “关键步骤: 中和 加入1.2N NaOH/HEPES中和” “立即进行 标准ELISA检测” 加样、孵育、洗板、显色等 (二)、激活步骤详解: 1.酸化:取适量样本(如100μL),加入1N HCl(如20μL),使pH值降至2.0-3.0。涡旋混匀,室温孵育10-15分钟。 2.中和:加入1.2N NaOH / 0.5M HEPES缓冲液(如20μL),将pH值恢复至7.2-7.6。务必充分混匀,避免局部过酸或过碱破坏TGF-β1。 3.立即检测:激活后的样本应尽快进行后续ELISA操作,不宜长时间放置。 重要提示:不同厂家试剂盒的激活条件可能略有差异,请务必遵循您所用试剂盒的说明书! 三、 标准ELISA操作流程(详细教程请看视频) 🧪【科研党福音】ELISA试剂盒骨折价来袭!送专业代测! 刷到这篇的科研er先别划走! 实验室预算紧、时间少、结果还总不稳? 别慌,你的专属“实验外挂”已上线!🔥 只需4步,坐等可靠数据到手! #科研 #实验 #ELISA #elisa #TGFβ1
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