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qpcr实验步骤视频版🔥 qPCR实验通过ΔΔCT法计算出flod change从而得到RNA在不同处理下的表达情况。那么实验过程是怎么样的呢?今天我们跟着视频一起来看一下吧~ ✅实验准备 提前准备好cDNA(模板)、引物、SYBR mix、ddH20、耗材等 Tip:在冰箱里长期放置的试剂会挥发或析出沉淀导致液体不均匀,所以试剂都需要先涡旋混均后离心才可以打开使用~在使用时候要记得轴对称配平和拧上保护盖哦~ ✅试剂配制 一般情况下配制20uL体系进行qPCR实验,为了节省试剂和样品,也可以配制成10uL体系哦~因为需要配制复孔(技术学重复)以减小误差,所以可以先将除了cDNA以外的试剂配完,分装到PCR板上,再逐一添加cDNA 试剂 体积 2x SYBR mix 5ul 引物F/引物R 0.25ul/0.25ul ddH20 2.5ul cDNA 单独加入2ul ✅PCR布板 每一行连续的三个孔(如A1、A2、A3)作为技术学重复,加入一模一样的体系和cDNA。可以在板子上先每三个画一条竖线区分。 给大家分享一个小技巧,做qpcr实验结果想要稳定就需要加样准确无误差的移液器,比如我们实验室就会单独放在一个实验台只进行定量实验,加样的时候可以边加样边抬手,让液体自然靠近pcr板,这样能够减少组内差异哦。 ✅上机过程 ✅数据计算 得到qPCR结果后,去除不符合实验要求的孔(点击omit),在三组生物学重复中使用ΔΔCT法计算相对表达量。可以在表格里直接计算哦~ #研究生日常 #实验室日常 #poppy的科研生活 #qpcr #医学生
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