流式细胞术实验过程+上机流程(视频版🔥 流式细胞术(Flow Cytometry)是一种对悬浮在流体中的微小颗粒进行技术和分选的实验方法。可以检测细胞表面或细胞内分子的表达情况、鉴定和分离不同细胞类型等。 今天我们一起来看一下流式细胞术的实验过程+上机流程吧~ ✅制备单细胞悬液 细胞样品可以直接用刮刀刮下来,组织样品需要剪成小块后用活塞研磨,最后通过200目滤网过滤得到单细胞悬液。 ✅流式抗体染色 今天用的是爱博泰克的Mouse T Cells Panel,直接配色一套使用比较方便,T细胞分群结果也很明显。ABclonal是利用SMab®重组兔单抗技术,开发的ABflo®系列全新兔单克隆流式抗体特异性高、灵敏度高、批次间稳定性好,还有极高的信噪比。 ⚠️需要注意流式上机时设置blank组、单阳组和FMO对照。 Blank就是空白对照或未染色细胞组(不加抗体染色)。 单阳管即单染对照,单阳管可以用细胞,也可以用补偿微球,但是不能混合一管染,细胞也最好是跟样本接近的类型,不要两种相差很大的细胞混合在一起做,如药物处理和未处理的细胞混合做单染 FMO对照(荧光扣除对照,抗体减一对照),建议低表达或连续表达的靶点设置该对照 ✅上机流程 执行完开机流程后,依次上阴性管、单阳管和FMO管,按照文献或者爱博泰克抗体说明书的图圈门和调补偿(防止不同抗体串光)。之后检测实验组即可~ 🔥注意:全程在冰上进行,抗体染色及之后步骤需要避光 #poppy的科研生活 #细胞实验 #流式细胞术 #爱博泰克 #ABclonal
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✨【FlowJo流式数据处理教程 | 新手友好版】✨ 大家好,今天跟大家分享一下 如何用FlowJo软件处理流式数据,超详细步骤来啦! 不论你是科研小白,还是第一次用流式的小伙伴,这篇都适合收藏!📚 🌈 基本操作流程: 1️⃣ 打开FlowJo,导入待处理的流式数据拖拽进软件。 2️⃣ 点击空白组数据,调整横轴FSC-A,纵轴SSC-A,圈选活细胞。 3️⃣ 点击“小图T”,调整细胞群体位置,横纵轴调整,圈住主细胞群,过滤掉碎片和死细胞~ 4️⃣ 接着,调整FSC-W和FSC-H,圈选单细胞,双击确认。 5️⃣ 再来SSC-W和SSC-H,最终筛选单细胞群,双击确认搞定! 🌟 荧光强度分析: • 调整横轴,选择需要的滤光片(比如446nm),调整为直方图! • 对空白组设置阴性对照,点击“数据分析”,选择mean,获取荧光强度均值~ 🎯 批处理Tips: 为了保证所有样品分析一致,可以把空白组的所有步骤拖拽到样品,批量处理! 🔑 记得手动调整一下圈的位置,确保主细胞群都在圈内哦! 🌸 数据展示: • 单细胞数据拖到lay out中,检查分布情况,微调坐标~ • 图像调节:点击smooth和model快捷键,微调平滑;颜色淡灰色,整体更美观! • 最后点击导出按钮,选择tiff格式,高清图get! 💡 数据导出: 需要导出荧光均值?table editor帮你搞定,选择导出参数,输出表格,方便汇总分析~ 🧬 总结: 以上就是FlowJo流式数据处理的全流程,适合刚入门的科研党朋友! 有问题欢迎评论区讨论,一起进步呀💪~ #流式细胞术 #FlowJo #实验小技巧 #科研日常 #流式数据处理
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