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高中生物选三第19题 19人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,由a链和β链(hCGβ)结合而成。近年研究显示,hCGβ也可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞,与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点,下图1为其制备的基本方案。 (1)构建基因表达载体。图中获取hCGβ基因的方法属于_____,hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因,其目的是___。当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时,在重组酶作用下发生同源切割,将目的基因直接插入。本方案中研究人员运用同源切割的方式在hCGβ基因两端加上一组同源序列A、B,然后将hCGβ基因与线性质粒载体混合后,在重组酶和DNA连接酶的作用下可形成环化质粒。这一过程与传统重组质粒构建过程相比,无需使用的酶是________。 (2)扩增基因表达载体。阶段Ⅱ将环化质粒导入用________处理的大肠杆菌,然后在含有_______的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。 (3)鉴定基因表达载体。为了检验目的基因是否融合成功,提取大肠杆菌中的质粒为模板,设计相应的引物对融合基因进行PCR,再将扩增产物进行电泳。电泳时需将待测样品与上样缓冲液混合后加入加样孔,缓冲液中含有的溴酚蓝作为电泳指示剂,以防___。电泳后得到图2所示结果,据图可判断____号样品最符合要求。 (4)导入受体细胞。阶段IV时,需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养,该培养基不需要添加以下哪_______(A.氨苄青霉素 B.组氨酸 C.无机盐 D.琼脂),可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。 (5)目的基因检测与鉴定。转化成功后的酵母菌菌株接种到液体培养基中,30℃恒温摇床上培养后获得培养物。将培养物离心后分出细胞和培养液两部分,细胞经_________处理后,再次离心取上清液,用抗hCGβ单克隆抗体分别进行检测。若培养液及上清液中均能检测到hCGβ蛋白,则说明_______ (6)发酵罐生产。从生产控制的角度分析,选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优势在于_ 19(1)化学合成法 有利于hCGβ进入内质网中加工(1分),并分泌到细胞外(1分) 限制酶 (2)CaCl₂氨苄青霉素 (3)条带迁移出凝
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当视野穿透皮肤、肌肉与血管的层层阻隔,将微观世界放大10亿倍,男人高潮瞬间的激素分泌如同一场宇宙级的生命庆典正在上演。原本肉眼不可见的细胞间隙化作广袤的星际空间,细胞膜上的受体蛋白像一座座悬浮的信号塔,闪烁着淡蓝色的微光。 随着神经脉冲的抵达,肾上腺皮质细胞如同被点燃的能量核心,内质网管道开始剧烈震颤,原本有序排列的胆固醇分子挣脱束缚,在酶的催化下分解重组,化作 pregnenolone 分子的金色流束,沿着细胞骨架的“轨道”飞速穿梭。每一个激素分子都像搭载着使命的飞船,表面镶嵌着独特的蛋白标记,在细胞质的“星云”中划出明亮的轨迹。 当激素分子抵达细胞膜,通道蛋白瞬间展开如同星门开启,大量皮质醇与睾酮分子喷涌而出,在血管形成的“星河”中扩散。这些分子表面的碳链结构如同旋转的推进器,带着它们奔向全身各处的靶细胞。此时的细胞内核,染色质丝微微舒展,仿佛在记录这场短暂却剧烈的生理脉冲,而线粒体则释放出额外的能量,让整个微观宇宙都笼罩在温暖的橙黄色光晕里。 这场持续数秒的微观盛宴中,数万亿个分子完成了从合成到释放的旅程,它们的轨迹交织成生命最原始的律动,最终随着信号消退而渐渐归于平静,只留下靶细胞表面尚未闭合的受体,见证这场短暂却深刻的生理奇迹。
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高中生物选三第2题 2研究者改造与肠道共生的大肠杆菌,口服该工程菌后激活机体特异性免疫,实现肿瘤的预防和治疗。部分肠道细菌能够分泌外膜囊泡(OMV),OMV能穿越肠道上皮屏障活化肠黏膜内丰富的免疫细胞(如图1)。细菌溶素A(ClyA)是外膜囊泡上含量较高的特异蛋白。 (1)构建表达载体:研究者利用含图2所示元件的表达载体转化大肠杆菌制备工程菌,ClyA基因的作用是表达ClyA,使__________定位至OMV表面;Fc表达产物能够与树突状细胞表面的特异性受体结合,提高树突状细胞__________OMV的能力。 (2)工程菌的制备与培养:为了便于将表达载体导入大肠杆菌,可用CaCl₂处理,以提高细菌________(结构)的通透性。然后将已改造的工程菌置于LB____________培养基中培养,并不断进行搅拌。 (3)检测:可用核酸分子杂交技术,或先对融合基因进行________,然后再进行凝胶电泳加以鉴定。琼脂糖凝胶的孔隙可起到____________的作用,一般来说,DNA分子量越小,配制琼脂糖凝胶的浓度越______。凝胶浸没于电泳缓冲液中,电泳缓冲液的作用是_____________________________。 DNA本身是无色的,可以用_______________________将DNA染色。如果最终在凝胶上出现多个条带,推测可能的原因有_______________________________。(写出两点) (4)使用:患者应将工程菌与__________一同口服,在肠道繁殖并表达后,使人体产生对___________的特异性免疫反应。 答案(14分) (1)OVA和Fc(写全给分);识别(识别、摄取) (2)细胞膜;液体 (3)PCR;分子筛(筛选);大(高) 维持合适的PH,并使溶液具有一定的导电性(2分);亚甲基蓝(溴化乙锭、荧光)引物设计不合理,退火温度过低(2分); (4)阿拉伯糖;黑色素瘤
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