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PCR主要用于DNA序列的扩增和检测;qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量;RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测;而RT-qPCR则结合了RT-PCR和qPCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。 PCR(聚合酶链式反应) 概念:PCR是一种体外扩增DNA分子的技术,利用DNA聚合酶和多个引物在所需温度下扩增目标DNA分子。其反应过程包括预变性、变性退火延伸和延伸三个阶段。 变性:将双链DNA加热至94~96°C,使其解链为单链。 退火:降低温度至50~65°C,使引物与单链DNA互补结合。 延伸:在70~75°C下,DNA聚合酶沿着单链DNA合成新的互补链。 qPCR(实时定量聚合酶链式反应) 概念:qPCR是一种实时检测PCR过程中荧光信号变化的技术,可以定量检测目标分子的含量。通过在反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中实时监测荧光信号的变化,从而计算出目标分子的拷贝数。 荧光标记:在PCR反应液中加入荧光标记物,如SYBR Green I或TaqMan探针。 荧光信号监测:在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。 数据记录与分析:每个循环结束后,通过光学系统记录荧光信号的增加,最后由软件计算出数据,用于实验结果的分析。 RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应) 概念:RT-PCR是一种把RNA分子转录为cDNA后,在体外进行DNA扩增的技术。它结合了反转录和PCR两个步骤,主要用于RNA分子的扩增和检测。 逆转录:以RNA为模板,在逆转录酶的作用下合成cDNA第一链。 PCR扩增:将cDNA作为模板,进行传统的PCR扩增。 RT-qPCR(逆转录实时定量聚合酶链式反应) 概念:RT-qPCR是一种结合了逆转录PCR和实时定量PCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。先通过反转录酶将RNA逆转录成cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。 逆转录:将RNA逆转录为cDNA。 实时定量PCR:在qPCR过程中实时监测荧光信号的变化,实现对cDNA的定量分析。 #PCR #qPCR #RT-PCR #RT-qPCR #DNA
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