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科研干货|Trizol法提取RNA指南 RNA提取是实验室必备技能之一,在这里给大家介绍一下RNA提取的原理和实验步骤。很多同学觉得做实验只要会做就好了,其实实验原理也很重要,只有你知道了实验原理是什么的时候,在做实验才会更加从容,不会因为某一步的操作疏漏而丢掉样品。 1⃣️实验原理 提取原理:破膜-分层-沉淀-洗涤-溶解 Trizol Trizol的主要成分有苯酚、8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇。苯酚裂解细胞,释放出细胞内含物DNA、RNA、蛋白质等; 8-羟基喹啉破坏RNase的活性,保护RNA;异硫氰酸胍蛋白变性剂,可以和苯酚一起破坏细胞膜; β-巯基乙醇,抑制RNase的活性。 氯仿 氯仿,即三氯甲烷有两个作用,一个是变性蛋白质,一个是萃取,使水相和有机相的分离,RNA溶解于水相。在体系中加入Trizol和氯仿之后可以分为三层,下层是苯酚-氯仿相,上层是水相(含RNA),中间为蛋白相。 异丙醇 沉淀水相之中的RNA。 乙醇 乙醇主要是洗涤作用,可以清洗RNA中的有机物杂质,如异丙醇,氯仿。并且乙醇挥发性较强,易于清理,从而得到纯净的RNA。 DEPC水 溶解RNA,DEPC水用二乙基碳酸酯(DEPC)处理过,去除了RNA酶污染。在溶解RNA的同时可以更好的保存RNA。 2⃣️实验步骤 详见图片,但是更建议跟实验室的师兄师姐要标准的protocol,每个实验室有每个实验室的风水,自己实验室的protocol能跑就不要换。 3⃣️核酸提取浓度检测 A260:核酸的主要吸收峰 A280:蛋白质的吸收峰 A230:化学污染的敏感指示 #生信分析 #生信 #生信图解 #医学 #生物信息学
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复盘手术实验家兔呼吸系统影响因素研究 《家兔呼吸运动调节,膈肌放电和呼吸衰竭》 气管插管→记录呼吸运动 膈肌群集性放电 →复制肺水肿动物模型 手术实验(气管插管和腹腔开腔) 一、术前: 抓取(颈部,腿托)-称重-麻醉-固定-剪毛 百分之二十乌拉坦,5-7ml/kg 耳背侧外耳耳缘静脉,耳尖部进针(静脉回心血,动脉射血) 前三分之一快,后面慢,推一段观察下 最佳麻醉状态:角膜反射消失,痛觉消失,呼吸平稳慢 二、注药 不用换头皮针,直接换注射器。处死才拔下来 换生理盐水 三、气管插管 手术弯剪→找气管位置(颈部正中)→玻璃分针和止水钳→第三第四个软骨环上剪一半→再往上端剪(倒T型剪口)直剪刀(大的)→往下插气管插管(细端插入气管,主支插呼吸换能器) 眼科剪(神经、血管) 四、膈肌 寻找(剑突下方,和腹腔连接部分,总膈) →引导电极插在膈肌上(横插入) 1.一通道,膈肌放电电极,有个夹子夹在皮肤边缘 2.二通道呼吸能量换能器 五、记录实验结果 1.描记正常呼吸运动曲线,和膈肌放电曲线(和吸气同步) 2.co2气囊,不要全部挤入,离口远一点(防止窒息),记录膈肌放电波形,和呼吸变化→加深加快 3.增大无效腔(肺泡无效腔,解剖无效腔→不进行气体交换的管道→查个长导管)对呼吸运动影响→观察→依然加快加深 4.耳缘静脉推入百分之3乳酸1ml,观察(本质H离子血液里)均匀快速,离开生理盐水也推一点(防止药物停留在导管里 5.推入尼可刹米(药物,中枢呼吸兴奋剂→呼吸衰竭的人用,避免呼吸暂停)0.2ml每kg药理学 6.复制肺水肿模型 ①注射油酸0.2ml每kg,三十分钟后追加0.2ml(多次,没变化就加)记录时间 →一直到气管中出现大量粉红色泡沫样液体 →此时呼吸曲线变浅、频率 ②处死家兔(针头用完处理,矿泉水瓶里统一处理,平时用带盖) ③取两肺,不能挤压肺 测肺系数=肺湿重(g)÷体重(kg)(大粗剪刀) 正常家兔4-6(4.21+-0..5) 水肿偏大 六、数据分析 膈肌放电 1.⭐️截图方法(保存实验结果)→暂停,右键点击添加实验标签 七、 延髓呼吸中枢 原理,H离子刺激中枢化学感受器,外周化学气(氧气和co2刺激) 肺泡通气量=(潮气量-无效腔)×呼吸频率 静脉氢离子不能通过血脑屏障→乳酸只能刺激外周 尼可刹 #医学#家兔实验#动物手术#肺水肿#医学实验
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