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科研干货|Trizol法提取RNA指南 RNA提取是实验室必备技能之一,在这里给大家介绍一下RNA提取的原理和实验步骤。很多同学觉得做实验只要会做就好了,其实实验原理也很重要,只有你知道了实验原理是什么的时候,在做实验才会更加从容,不会因为某一步的操作疏漏而丢掉样品。 1⃣️实验原理 提取原理:破膜-分层-沉淀-洗涤-溶解 Trizol Trizol的主要成分有苯酚、8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇。苯酚裂解细胞,释放出细胞内含物DNA、RNA、蛋白质等; 8-羟基喹啉破坏RNase的活性,保护RNA;异硫氰酸胍蛋白变性剂,可以和苯酚一起破坏细胞膜; β-巯基乙醇,抑制RNase的活性。 氯仿 氯仿,即三氯甲烷有两个作用,一个是变性蛋白质,一个是萃取,使水相和有机相的分离,RNA溶解于水相。在体系中加入Trizol和氯仿之后可以分为三层,下层是苯酚-氯仿相,上层是水相(含RNA),中间为蛋白相。 异丙醇 沉淀水相之中的RNA。 乙醇 乙醇主要是洗涤作用,可以清洗RNA中的有机物杂质,如异丙醇,氯仿。并且乙醇挥发性较强,易于清理,从而得到纯净的RNA。 DEPC水 溶解RNA,DEPC水用二乙基碳酸酯(DEPC)处理过,去除了RNA酶污染。在溶解RNA的同时可以更好的保存RNA。 2⃣️实验步骤 详见图片,但是更建议跟实验室的师兄师姐要标准的protocol,每个实验室有每个实验室的风水,自己实验室的protocol能跑就不要换。 3⃣️核酸提取浓度检测 A260:核酸的主要吸收峰 A280:蛋白质的吸收峰 A230:化学污染的敏感指示 #生信分析 #生信 #生信图解 #医学 #生物信息学
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