Trizol法,也常被称为*异硫氰酸胍-酚法*,是一种用于从各种生物样本(如细胞、组织、血液、植物等)中*快速、高效地分离和纯化总RNA的经典实验室技术。它由P. Chomczynski和N. Sacchi在1987年优化并推广,至今仍是许多实验室的首选方法。简单来说,这个实验的目的是获取*高质量、完整且无降解的RNA,用于后续的分子生物学研究,如RT-PCR、qPCR、RNA测序、Northern Blot等。 一、实验基本原理 Trizol是一种单相溶液,其主要成分是: 1. 苯酚:一种强变性剂,能有效地使蛋白质变性、沉淀,并破坏细胞结构。 2. 异硫氰酸胍:一种强烈的蛋白变性剂和RNase抑制剂。RNase(核糖核酸酶)是RNA的头号杀手,它无处不在且极其稳定。异硫氰酸胍能迅速灭活RNase,保护RNA不被降解。 3. β-巯基乙醇(有时需要额外添加):作为还原剂,进一步帮助打破蛋白质的二硫键,增强变性效果。 核心原理在于:利用Trizol试剂在酸性条件下,将不同生物大分子分配到不同的相中。 二、实验流程概览 1. 样本处理:收集细胞或组织,立即放入Trizol中并充分匀浆。 2. 相分离:加入氯仿,振荡,离心(~12,000g,15分钟,4°C)。 3. 转移水相:小心吸取上层无色水相(含RNA)到新管。 4. RNA沉淀:加入异丙醇,混匀,离心(~12,000g,10分钟,4°C),弃上清。 5. RNA洗涤:加入75%乙醇,涡旋,离心(~7,500g,5分钟,4°C),弃上清。 6.RNA溶解:空气中晾干沉淀(约5-10分钟),加入无RNase水溶解。 三、主要优点 高产量和高纯度:能从少量起始材料中获得大量RNA。 适用范围广:适用于多种样本类型(细胞、组织、植物、细菌等)。 同时分离其他分子:在回收RNA后,可以从中间层和有机相中进一步回收DNA和蛋白质。 快速有效:整个流程可以在1-2小时内完成。 成本相对较低:与一些商业化的RNA提取试剂盒相比,成本更有优势。 四、关键注意事项与挑战 严防RNase污染:操作迅速:相分离步骤需小心:乙醇务必晾干:RNA完整性评估: #rna #RNA #trizol
00:00 / 01:51
连播
清屏
智能
倍速
点赞30
00:00 / 03:34
连播
清屏
智能
倍速
点赞NaN
00:00 / 06:23
连播
清屏
智能
倍速
点赞NaN
00:00 / 13:40
连播
清屏
智能
倍速
点赞NaN
00:00 / 00:32
连播
清屏
智能
倍速
点赞NaN