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液相色谱或串联质谱前处理方法类型 使用LC-MS/MS测定化合物的含量,对样品进行前处理,方法选择的依据主要是样品类型、浓度、极性、稳定性等方面。植物样本需要液氮研磨、剪碎处理等,并进行有机溶剂提取。 1.固相萃取(SPE)法,填料选择反相C18柱(非极性),混合型柱(兼顾极性和非极性)来吸附,梯度洗脱分离(如5%-100%甲醇)提高目标化合物的回收率。和色谱柱与流动相的原理类似,但需要注意除盐。 2.液液萃取(LLE)法,通过添加有机溶剂,将样品中的目标化合物萃取出来。根据“相似相容”原理,需选择极性匹配的溶剂,比如,非极性目标化合物用正己烷,中等极性用乙酸乙酯等。为了防止乳化,加入盐析剂(如NaCl),离心后出现分层。可选择上清液,进行下一步的处理。 3.衍生化处理,通过衍生的方法可增强目标化合物的检测信号,尤其是低响应值的化合物。选用的目标化合物特异性的衍生剂(如丹磺氯),控制反应的条件(如低温、避光、pH值)和时间,需要平衡反应效率和副产物的干扰。衍生的成功与否,直接关系到后面检测器的信号。效果明显,可抑制基质效应,但操作复杂。 4.固相微萃取法,通过吸附剂填充短管充当固定相,当样品溶液通过时,目标化合物被吸附萃取,再用对应的溶剂选择性的洗脱。它集中了萃取和富集步骤,提供了分离效率。根据填充物的类型,可富集痕量的目标化合物。 5.蛋白沉淀法,通过有机溶剂(如甲醇、乙腈)或酸性沉淀剂使得样品中的蛋白质变性沉淀,离心后可以去除不溶物。适用于生物样品中小分子化合物的前处理,操作简单,需要控制有机溶剂的比例。离心机转速一般3000-4000r/min,20min;如果要去除更小的颗粒(如细胞碎片),可提升到10000r/min,10-20min。 6.膜过滤法,膜过滤是通过物理方法截留大分子的杂质(如蛋白质、颗粒物),减少色谱柱的堵塞和质谱信号的干扰。特别是复杂的生物样本(如细胞、组织、血清),一般用0.22um的膜(如尼龙膜)过滤,选择优质的材料,减少目标化合物吸附在膜上。#LCMS #液相色谱检测 #HPLC #检测服务
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