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威奥生物|科研小白一看就会的的BCA蛋白浓度测定操作步骤 操作步骤 1 、配制工作液: 根据标准品和样品数量, 按50体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B( 50:1)配制适量 BCA 工作液, 充分混匀。 2 、稀释标准品: 将标准品储存液稀释至 31.25~2000ug/ml, 推荐使用去离子水或 0.9% NaCl。 3 、将 25ul 的标准品和合适浓度范围的样本(比如 5ul样品+20ul稀释液)分别添加于96孔板的微孔中。 4 、各孔加入200ulBCA工作液, 充分混匀。 5 、盖上 96 孔板盖, 37℃孵育 30 分钟(如果浓度较低, 可适当提高孵育温度或延长孵育时间) 。 6 、冷却到室温, 用酶标仪测定 A562, 根据标准曲线计算出蛋白浓度(样品的蛋白终浓度需乘以相应的稀释倍数) 。 注意事项: 1. 低温条件或长期保存出现沉淀时, 可搅拌或 37℃温育或微波几十秒使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。 2. 要得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔且标准品与样品处理要尽量一样(如采用同样的溶液溶 解样品和标准品) ,每次均应做标准曲线。 3. 当试剂 A 和 B 混合时可能会有浑浊, 但混匀后就会消失 。需准备 37℃水浴或温箱 、酶标仪或普通分光光度计, 测定波长 为 540-595nm 之间, 562nm 最佳 。酶标 仪需与 96 孔酶标板配套使用 。使用分光光度计测定蛋白浓度时, 试剂盒测定的样 品数量会因此而减少 。使用温箱孵育时, 应注意防止因水分蒸发影响检测结果 。如染色后蛋白条带不明显, 则说明蛋白含 量过低, 建议延长染色时间。 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 #WB #wb #BCA #bca
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