可注射水凝胶制备方法 第一步:材料准备与溶液配制 原料选择:选择高纯度的医用级或研究级海藻酸钠粉末。根据应用需求,可选择不同分子量和古洛糖醛酸(G-block)含量的海藻酸钠,这会影响最终凝胶的强度和成胶速度。 配制海藻酸钠溶液:将海藻酸钠粉末缓慢加入到去离子水或磷酸盐缓冲液(PBS)中。此过程需要在持续搅拌下进行,例如使用磁力搅拌器,以防止粉末结块。海藻酸钠溶解速度较慢,通常需要搅拌数小时甚至过夜,才能得到均一、澄清、粘稠的溶液。常用的浓度范围为1%至3%(w/v)。 灭菌处理:由于许多应用涉及生物医学,溶液必须无菌。可采用滤膜过滤(使用0.22微米孔径的滤膜)的方式对配制好的海藻酸钠溶液进行灭菌。注意:高温高压灭菌会降解海藻酸钠分子,应避免使用。 第二步:交联剂的制备与“隔离” 配制钙离子源:常用的钙离子源是氯化钙(CaCl₂)溶液。将其溶解在去离子水中,配制成一定浓度的溶液(如100-500 mM)。 关键步骤——实现“可注射性”:纯的海藻酸钠溶液与钙离子溶液一旦直接混合,会瞬间在接触界面形成致密的凝胶膜,导致混合不均,无法注射。因此,需要一种策略将钙离子“隔离”开来,使其在注射前不与海藻酸钠接触,而在注射后能迅速释放并引发交联。最常用的方法是使用微囊化技术: 将氯化钙溶液与另一种不相溶的溶液(如油相)混合,在高速剪切和乳化剂的作用下,形成微米级的钙离子液滴。 另一种更精细的方法是制备柠檬酸钙或碳酸钙等微溶性的钙盐颗粒。这些颗粒在酸性环境下稳定,但进入中性环境(如与海藻酸钠溶液混合后)会缓慢释放钙离子。 #实验#医工交叉#材料科学#制作过程
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琼脂糖凝胶电泳 #琼脂糖凝胶电泳 是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中。 蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
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