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蛋白质主要由碳氢氧氮等元素组成,基本结构单位是氨基酸,共有20种常见类型。氨基酸通过肽键连接形成多肽链,蛋白质的结构通常为四级 一级结构 蛋白质的一级结构是通过DNA编码的线性氨基酸序列.蛋白质中的氨基酸通过连接一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基的肽键相连.每次肽键结合时释放一个水分子.相连的碳,氮和氧原子的序列构成了蛋白质骨架。 这些蛋白质链通常折叠成两种类型 二级结构:α螺旋,或β折叠. α螺旋是通过附近的氨基酸的氨基和羧基之间的氢键稳定下来的右手螺旋线圈.当两个或多个相邻的链被氢键固定时,形成了β折叠。 蛋白质的三级结构是蛋白质链的三维形状. 这种形状由构成链的氨基酸的性质局决定.许多蛋白质形成球状,把疏水侧链包围在内部,远离周围的水.膜结合蛋白外面聚集着疏水残基,以便它们可以与膜中的脂质信相互作用.带电荷的氨基酸允许蛋白质与具有互补电荷的分子相互作用,许多蛋白质的功能依赖于它们三维形状. 例如:血红蛋白形成一个袋状以在中心保持血红素,一种含有铁原子的小分子,用来与氧气结合.两条或更多条肽链可以通过几个亚基结合在一起,形成一个功能分子.正常血红蛋白A是由两个α亚基与两个β亚基形成的四聚体相互合作以便它们的复合物可以在肺部吸收更多的氧气并将其释放到体内. 四级结构 具有二条或二条以上独立三级结构的多肽链组成的蛋白质,其多肽链间通过次级键相互组合而形成的空间结构称为蛋白质的四级结构。其中,每个具有独立三级结构的多肽链单位称为亚基。 某些蛋白质分子可进一步聚合成聚合体。聚合体中的重复单位称为单体,聚合体可按其中所含单体的数量不同而分为二聚体、三聚体……寡聚体和多聚体而存在,如胰岛素在体内可形成二聚体及六聚体。 #蛋白质结构 #氨基酸 #肽链 #DNA编码 #科研
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亲和层析是利用分子间特异性互相作用而进行分离的一种层析技术,生物分子间存在很多特异性的相互作用。组氨酸标签蛋白对 Ni2+及其它一些金属离子有高选择性的亲合力,这些金属离子能够用螯合配体固定在层析介质上。因此带有组氨酸标签的蛋白能够选择性结合在装配了金属离子的填料上,而其它的细胞蛋白则不能结合或仅能微弱结合。以下是组氨酸标签蛋白常用的几种填料: Ni-IDA Ni-IDA 填料是以亚氨基二乙酸(IDA)为配基,螯合镍离子(Ni²⁺)后制成的金属螯合亲和层析填料。它通常以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,IDA 通过化学方法偶联到琼脂糖凝胶上。IDA是三配位,与Ni²⁺螯合后形成比较稳定的平面四边形结构,有更多位点与组氨酸标签上的咪唑环配位,从而结合目的蛋白。其特点是蛋白载量较高。 2、 Ni—NTA Ni-NTA 填料是将氮川三乙酸(NTA)作为配基,螯合Ni²⁺后得到的。NTA是四配位,与 Ni²⁺形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体中心,能有效保护镍离子免受小分子进攻,结构更加稳定。Ni-NTA 填料对螯合剂、还原剂、碱性等具有更好的耐受性,适用性更广,配体更稳定,选择性也更高。 3、 Ni-TED Ni-TED填料是以三乙基四胺二乙酸(TED)为配基螯合Ni²⁺的填料。TED与金属离子形成五配位结构,是三者中最为稳定的。这种高度稳定的结构使得Ni-TED在极端条件下依然能保持其结合能力,对螯合剂EDTA和还原剂(如DTT)具有极高的耐受性。Ni-TED的特点是特异性和纯度极高,尤其适用于对纯度要求极高的实验,但其结合蛋白量相对较低。 4、 未螯合金属离子的介质 IMAC填料的分离逻辑基于 “配体-金属离子-目标蛋白” 的三级相互作用。在琼脂糖、磁珠、硅胶等基质表面,通过化学键连接螯合配体(如 IDA、NTA、TED),配体通过氮、氧等原子与金属离子(如 Ni²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺)形成稳定螯合物,使金属离子固定在填料表面。 #His标签 #蛋白纯化 #亲和层析 #Ni-IDA #Ni—NTA
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病理报告里的“侦探”:免疫组化在帮我们看什么? 大家好,我是陈斯泽医生。很多患者看到病理报告中的“免疫组化”都会好奇:这是什么?今天我就为大家解释一下。 免疫组化不是治疗,而是一项精密的侦察技术。它的原理很像“钥匙找锁”:我们用特制的抗体(好比钥匙)去寻找细胞中的特定抗原(好比锁孔)。一旦匹配成功,目标就会在显微镜下显色,让我们看清它的真面目。 这项技术主要能解答三个关键问题: 1. 鉴定身份: 当细胞形态难以分辨时,免疫组化可以提供答案。例如,使用“细胞角蛋白(CK)”抗体,如果结果呈阳性,就支持细胞是上皮来源的癌。 2. 追溯来源:肿瘤的老家在哪? 对于需要寻找原发灶的肿瘤,免疫组化能提供线索。像“TTF-1”这个指标若为阳性,就强烈提示肿瘤可能来源于肺部。 3. 评估特性: Ki-67:反映肿瘤的增殖活力,指数越高说明生长越活跃。 ER/PR:检测肿瘤是否受激素影响,揭示其生物学特性。 简单来说,免疫组化就是一位精准的“翻译官”,把细胞的秘密转译成我们看得懂的信息。希望这个解释能帮助您更好地理解病理报告。 我是陈斯泽医生,用易懂的语言,为您解读肿瘤知识。 #广东药科大学附属第一医院肿瘤免疫科 #泽医论道陈斯泽 #广州健康科普传播联盟 #健康广州科普同行 #肿瘤科普
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