00:00 / 01:15
连播
清屏
智能
倍速
点赞169
00:00 / 01:06
连播
清屏
智能
倍速
点赞73
00:00 / 04:20
连播
清屏
智能
倍速
点赞15
00:00 / 01:42
连播
清屏
智能
倍速
点赞26
00:00 / 00:31
连播
清屏
智能
倍速
点赞8
人脐带间充质基质细胞(hUC-MSCs)冻存实验 #细胞培养基 #细胞冻存 #达科为 #达优 #细胞培养 1.准备工作 配制完全培养基:提前将GF20 Plus MSC Xeno-Free SFM (Cat#6914132/6914142)平衡至室温,按照M200无血清培养基:F20 Plus MSC添加物=50:1的体积比例配制(使用量按需配制即可)。 取部分配制好的完全培养基、细胞程序降温冻存盒、无血清细胞冻存液(Cat# 6032011)放入4℃热平衡。 将备用的细胞冻存管做上详细的记号,随后放入-20℃热平衡。 2.细胞冻存 参考细胞传代流程对要冻存的细胞进行消化、计数。 (冰上操作)根据细胞计数的结果,往细胞沉淀中加入4℃平衡过的细胞培养基进行重悬,使细胞浓度调整到两倍的冻存浓度(比如想要冻存的细胞浓度为1 ×10^7 cells/mL,就用培养基将细胞浓度调整到2×10^7 cells/mL),然后将细胞吹打均匀。 (冰上操作)往细胞悬液中缓慢逐滴加入等体积的、已4℃平衡过的细胞冻存液,轻轻混匀。 (冰上操作)以每管1 mL细胞悬液的量,将其分装入已在-20℃热平衡过的冻存管中,将冻存管的盖子拧严实。 立即将冻存管放入已经在4℃平衡过的细胞程序降温冻存盒中,然后将冻存盒放入-80℃冰箱内,也可以将冻存管放于程序降温仪中,以1℃/min的速率降温到- 80℃。 24h后,把-80℃保存的冻存管转移到液氮罐中。
00:00 / 01:35
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
人脐带间充质基质细胞(hUC-MSCs)传代培养实验 #细胞培养 #科研实验 #细胞培养基 #达科为 #达优生物 1.配制原代培养完全培养基 提前将hMSC原代培养增强剂(Cat#6122133)和GF20 Plus MSC Xeno-Free SFM (Cat#6914132/6914142)平衡至室温,按照M200无血清培养基:F20 Plus MSC添加物:hMSC原代培养增强剂=50:1:1的体积比例配制(使用量按需配制即可)。 2.脐带处理 (1)清洗脐带。 在无菌环境下取出新鲜脐带组织,置于洁净的无菌培养皿中,倒入加有1%青霉素-链霉素溶液(100×)的DPBS(Cat#6062011),清洗脐带表面,并使用止血钳向下挤出淤血。期间需更换DPBS、重复操作3-4次,尽量将淤血清理干净。 随后用手术剪将脐带剪成合适的长度,转移到新的培养皿中,加入不含双抗的新鲜DPBS溶液,再次将脐带组织的淤血清理干净。 将脐带转移到装有DPBS(不含双抗)的50mL离心管中,来回颠倒,多次洗涤,尽量将脐带内的淤血清洗干净。 (2)去除脐静、动脉,制备脐带匀浆。 将清洗干净的脐带组织置于洁净的无菌培养皿中,找到两根脐动脉和一根脐静脉, 沿着脐静脉将脐带组织剪开或撕开,用手术刀将静脉血管粘膜刮弃。去除两根动脉血管,将华通氏胶撕碎,用手术剪剪成匀浆。随后将脐带匀浆转移至50mL离心管中,加入完全培养基至淹没匀浆。 3.接种培养 在T75培养瓶中加入5 mL完全培养基,使培养基能够完全覆盖整个底面即可。将剪碎的组织块按量平均转移至 T75 培养瓶内(大约每瓶1mL匀浆),轻敲培养瓶使组织块分散,晃动培养瓶使组织块在培养瓶中均匀分布,将培养瓶置于37℃、5% CO2培养箱内培养。 *注意事项:培养期间不要晃动培养瓶,以免组织块受到干扰,影响MSC爬出。 4.换液与补液 3天后进行首次换液,之后每3天换液一次。换液时稍微倾斜培养瓶,移除大部分培养基,剩余约1 mL培养基即可,然后沿着瓶壁补充4mL新鲜配制的完全培养基。
00:00 / 02:37
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
00:00 / 02:35
连播
清屏
智能
倍速
点赞1
00:00 / 02:10
连播
清屏
智能
倍速
点赞10
00:00 / 01:48
连播
清屏
智能
倍速
点赞10
00:00 / 17:18
连播
清屏
智能
倍速
点赞29
00:00 / 04:24
连播
清屏
智能
倍速
点赞8