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内源蛋白Co-IP孵育操作全流程➕实验技巧❗ @辉骏生物 3分钟教会你内源蛋白Co-IP免疫共沉淀——proteinA/G磁珠与抗体孵育,再与总蛋白共孵育全流程,新手可跟着镜头做,避免实验踩坑。 ❗附上实验中的一些小tips: 1️⃣ 磁珠预处理(关键步骤!目的是除去磁珠的保存液) 2️⃣孵育时间(孵育时间需要根据你目的蛋白的一个表达水平或者是抗体一个亲和力来进行确定); 3️⃣ 4°混匀仪(有混匀仪直接用,没有也可用摇床替代,但需要调慢频率); 4️⃣ 漂洗缓冲液(需要预冷4℃,全程冰上/4℃操作,防止蛋白降解)。 ✅做过 IP 实验的小伙伴都懂,抗体磁珠最让人头疼的痛点,就是孵育洗脱后,WB结果中会出现抗体轻重链的杂带,这些杂带往往会掩盖目的互作蛋白的条带,导致结果难以准确解读,甚至让整个实验功亏一篑。 ✅这里,必须给各位科研人安利一款 “实验神器”——标签纳米抗体磁珠!因为羊驼来源的纳米抗体只有15kD左右,没有传统抗体的轻重链结构,从根源上解决了IP实验轻重链污染的问题,其成本低、亲和力也很好,可以达到非常好的IP结果! ps:有需要Flag等标签纳米抗体磁珠的小伙伴可以联系我们辉骏生物!同时我们还提供IP-MS质谱鉴定服务!#coip #免疫共沉淀 #科研日常 #研究生 #辉骏生物
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