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如何培养293t细胞 养好293T细胞是做好稳转的第一步❗之前多次分享过稳定细胞株的构建,其实要做好稳转,养好工具细胞293T很重要,今天分享下293T细胞的培养~ 1️⃣培养条件:高糖DMEM,补充10%胎牛血清(FBS)或血清替代、1%双抗可加可不加(我养细胞不加双抗);血清批次差异显著影响细胞状态,我们课题组用XR血清替代很久了,品控稳定,细胞状态妥妥的😊 [向右R]之前刷到配完全培养基时500mL培养基要不要倒出50mL后再加血清?我的方法→如果近期要用无血清培基我就倒出50mL,不用就直接往500mL加50mL血清,不用在小问题上纠结~ 2️⃣ 293T细胞贴壁性弱、生长快、易聚团 ▷复苏后24h内避免扰动,用DMSO冻细胞在复苏时离心去除冻存液后再转入培养瓶中 ▷293T细胞贴壁不紧,换液时一定要轻,贴着侧壁慢慢加 ▷细胞密度80-90%时进行传代,消化时可以不用pbs洗,将培基吸干后加500μL胰酶(T25),转动培养瓶使胰酶均匀分布,室温消化30S,加入完全培养基终止消化,吹打几十下就行,过度吹打可能会导致细胞聚团,1:3传代即可 ▷冻存:T25长满后冻两管,复苏一管两天长满~ ⚠️293T贴壁不紧,密度高且营养不够时很容易大片脱落,T25培养瓶可以加6-7mL培养基;从培养箱拿出细胞处理时动作要轻一点,避免液体晃动太大;包病毒时,T25长满后分成3份铺到大皿,两天刚好长到70%~ #科研#293T细胞 #细胞培养#实验室日常 #博士生日常
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解锁双荧光素酶实验中miRNA与靶基因新关系 今天咱来唠唠超有趣的双荧光素酶实验中 miRNA 和靶基因序列的那些事儿~ 先看看实验材料 。 细胞可以用 293T,或者按指定,不过指定的细胞系可不保证转染效率哦。 另外还会用到烟草。 载体方面也有讲究,要把 lncRNA 序列、circRNA 序列或者转录因子 3’UTR 区序列构建到 pmirGLO 载体上,同时还要合成 mimics 及 mimics NC 。 再瞅瞅实验原理的示意图 。 这里面涉及到 microRNA 和靶基因的互动,当它们结合情况不同时,会影响荧光素酶的表达,进而影响发光情况 。 这就像一把神奇的钥匙(miRNA)去开对应的锁(靶基因),不同的匹配状况会触发不同的 “机关”~ 实验分组也很关键 。 有 pmirGLO-lncRNA PVT1-wt+mimics control 、pmirGLO-lncRNA PVT1-wt+miR-145 mimics 、pmirGLO-lncRNA PVT1-mut+mimics control 、pmirGLO-lncRNA PVT1-mut+miR-145 mimics 这几种。 尤其要注意 pmirGLO-lncRNA PVT1-wt+miR-145 mimics ,它可是二者缺一不可呢~ 这个双荧光素酶实验在研究 miRNA 和靶基因的相互作用上超有用 ,能帮我们了解基因表达调控的奥秘。 不管是做科研项目,还是探索生物学现象背后的机制,都能派上大用场! 宝子们要是对这个实验感兴趣,或者在实验设计、操作上有啥疑问,都可以来一起聊聊呀~ #生物 #实验 #科研 #双荧光素酶 #2025高考
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