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石蜡切片是病理诊断和组织学研究中常用的一种技术手段,以下是其相关介绍: 制作过程 - 取材与固定:选取具有代表性的组织样本,迅速放入固定液中,如10%中性缓冲甲醛溶液,使组织蛋白变性凝固,保持其原有形态结构。 - 脱水与透明:将固定后的组织依次经过不同浓度的乙醇进行脱水,再用二甲苯等透明剂置换乙醇,使组织透明,利于石蜡渗透。 - 浸蜡与包埋:把透明后的组织放入融化的石蜡中,经过几次浸蜡后,将组织放入模具中,倒入石蜡,冷却凝固后形成含有组织的石蜡块。 - 切片:使用切片机将石蜡块切成厚度通常为3 - 5微米的薄片,漂浮在温水表面使切片展平,再捞起贴附在载玻片上。 - 染色与封片:常用苏木精 - 伊红(HE)染色,使细胞核染成蓝色,细胞质染成红色,然后用中性树胶封片,便于显微镜下观察。 应用 - 病理诊断:是病理科对疾病进行诊断的重要方法,通过观察组织形态、细胞结构及病变特征,可对肿瘤等多种疾病进行诊断和分类。 - 组织学研究:用于研究正常组织的结构和功能,以及疾病状态下组织的病理变化,为基础医学研究提供形态学依据。 - 教学与科研:在医学教学中,是学生学习组织学和病理学知识的重要教具;在科研领域,可用于研究疾病的发生机制、药物疗效评估等。 优点 - 形态保存好:能较好地保存组织的形态结构和细胞内的各种成分,清晰显示组织和细胞的细微变化。 - 可长期保存:经过石蜡包埋的组织切片在合适的条件下可长期保存,便于随时查阅和进行进一步的研究。 - 适用范围广:适用于各种组织和器官,包括人体及动物的组织,是一种应用广泛的组织学技术。 缺点 - 制作过程复杂:流程较为繁琐,需要经过多个步骤,且每个步骤都需要严格控制条件,否则会影响切片质量。 - 抗原活性损失:在制作过程中,一些抗原可能会受到破坏或遮蔽,影响免疫组化等进一步检测的结果,需要进行抗原修复等处理。 - 不能观察活细胞:是一种对固定后的组织进行的静态观察方法,无法观察细胞的动态变化和生命活动。
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动物标本石蜡切片制作流程及注意事项 送检标本的要求及注意事项 ①、动物标本离体后,应在 15 分钟内迅速浸入 10% 中性福尔马林固定液中,保证标本完全被固定液覆盖,固定液体积应为标本体积的 6 - 12 倍。 ②、对于尸检标本,需在动物死亡 3 小时内启动取材工作,防止组织因长时间放置而腐败变质,影响后续切片观察。 ③、若需对送检组织进行特定部位的重点取材,务必在送检单上清晰注明,并以文字详细描述取材部位的特征。 ④、若标本涉及免疫组化等特殊检测需求,需在标本固定前与实验人员充分沟通,完成预处理工作,防止固定剂对检测结果产生不良影响。 取材时注意事项 ①、依据实验研究方向,准确选取具有代表性的组织区域,包括病变中心、周边正常组织及二者交界部分,单块组织尺寸控制在 1.2cm×1.2cm×0.2cm 左右。 ②、多部位取材时,采用数字编号与形状标签相结合的标记方式,并制作取材记录表格,详细标注各部位信息。 ③、条件允许时,对特殊组织进行多角度拍照,留存原始形态资料。 ④、对于含有坚硬结构的组织,需进行软化处理;纤维含量高的组织,需适当修剪,保证后续制片顺利进行。 固定时注意事项 ①、常规使用 10% 中性福尔马林作为固定液,针对特殊组织(如内分泌腺体)可采用改良的 Carnoy 固定液,固定时长保持在 18 - 30 小时。 ②、固定液体积应至少为组织体积的 5 - 6 倍,对于大型组织要适时补充或更换固定液。 ③、固定过程宜在室温(22 - 26℃)环境下进行,若在低温(6℃)条件下固定,需将时间延长至 48 - 60 小时。 乙醇脱水时注意事项 ①、严格按照梯度脱水步骤操作:70% 乙醇(1.5 小时)→85% 乙醇(2.5 小时)→95% 乙醇(3 次,每次 1 小时)→无水乙醇(3 次,每次 1.5 小时)。 ②、富含油脂的组织,需在无水乙醇中增加脱水次数,确保油脂充分去除。 ③、根据组织实际情况灵活调整脱水时间,避免脱水不充分或过度脱水。 包埋时注意事项 ①、选用 54 - 56℃医用石蜡,熔化后进行双层过滤,确保石蜡纯净。 ②、包埋时保证组织位置端正,在包埋盒上清晰标注组织信息与包埋方向。 ③、控制包埋温度在 56 - 58℃,针对韧性较大的组织,可选用中熔点石蜡辅助包埋。 #石蜡切片
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