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1)直接驯化 大部分情况下,培养于其他培养基中的细胞,可以直接适应新培养基,只要按照日常传代方式(稀释)更换培养基即可。 2)渐进式驯化 如果遇到难以驯化的细胞,可采用梯度更换培养基的方式 注意:选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化 ①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定,当细胞密度达到2x10 6 cells/ml后进行传代,传代细胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL,原培养基与新培养基的比例为75:25; ②将细胞置于37℃,5% CO2,转速为120 rpm的恒温摇床中进行培养; ③当细胞密度3-4天后达到3x10 6 cells/ml且细胞活率>90%,传代时原培养基与新培养基的比例为50:50,细胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如细胞生长慢,可离心上清,留20%培养基,加入80%的原培养基与新培养基比例为75:25的混合培养基,继续培养; ④重复步骤③逐步增加新培养基所占的比例(原培养基与新培养基的比例为25:75至10:90)直到100%的新培养基; ⑤经过在100%的新培养基中的几次传代培养,传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×10 6  cells/mL,细胞活率大于90%,这说明细胞已经适应了新培养基。之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL,一般传代2-3次后再进行转染实验。 注意: 一般细胞驯化过程中,三代细胞的状态可能不是很好,但一般从第四代开始状态会有改善。如果细胞状态不好,可在每个梯度培养基比例时,多进行2两次传代,使其更好的适应无血清培养基。 #293细胞 #无血清驯化 #细胞传代 #293细胞转染 #试剂
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