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什么是内参基因?为什么WB、qPCR要内参? 刚进实验室那会,每次做 WB 和 qPCR,师兄都反复强调 “别忘了内参”,那么什么是内参呢? 今天把我理清的知识点分享给新手宝子,看完就懂为啥这俩实验离不它~ 先一句话说清楚:内参基因就是 “管家基因”,不管细胞在啥状态(不同组织、不同实验处理),它的表达量都特别稳,不会随便变。核心作用就一个 —— 帮你消除实验里的各种误差,让结果靠谱 为啥 WB 实验必须用内参? WB 要测目标蛋白的表达变化,但是WB实验过程繁琐,非常容易出现各种问题,内参就是来填坑的: 1. 校正上样量差异: 2. 监控实验流程有没有问题:WB 步骤超多人(提蛋白、电泳、转膜、孵育抗体),哪步出问题都可能让条带异常。通过内参可以判断是否是流程上出现了错误 为啥 qPCR 也离不开内参? qPCR 要定量 mRNA 表达,但从提 RNA 到扩增,每步也都可能出偏差: • 有的样本 RNA 提得少,有的提得多; • 反转录时,有的样本转成 cDNA 的效率低; • 加样时手一抖,加少了点模板… 这些误差都会让目的基因的 CT 值不准,根本分不清:是目的基因真的表达变了,还是误差导致的信号变了? 这时候内参就派上用场了!比如常用的 GAPDH,在不同样本里表达稳得很。把目的基因的 CT 值减去内参的 CT 值(算 ΔCT),再和对照组对比(算 ΔΔCT),就能抵消提 RNA、反转录、加样的误差,最后算出来的 2^(-ΔΔCT),才是目的基因的真实相对表达量~#研究生 #内参 #WB #生物学
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