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人脐带间充质基质细胞(hUC-MSCs)传代培养实验 #细胞培养 #科研实验 #细胞培养基 #达科为 #达优生物 1.配制原代培养完全培养基 提前将hMSC原代培养增强剂(Cat#6122133)和GF20 Plus MSC Xeno-Free SFM (Cat#6914132/6914142)平衡至室温,按照M200无血清培养基:F20 Plus MSC添加物:hMSC原代培养增强剂=50:1:1的体积比例配制(使用量按需配制即可)。 2.脐带处理 (1)清洗脐带。 在无菌环境下取出新鲜脐带组织,置于洁净的无菌培养皿中,倒入加有1%青霉素-链霉素溶液(100×)的DPBS(Cat#6062011),清洗脐带表面,并使用止血钳向下挤出淤血。期间需更换DPBS、重复操作3-4次,尽量将淤血清理干净。 随后用手术剪将脐带剪成合适的长度,转移到新的培养皿中,加入不含双抗的新鲜DPBS溶液,再次将脐带组织的淤血清理干净。 将脐带转移到装有DPBS(不含双抗)的50mL离心管中,来回颠倒,多次洗涤,尽量将脐带内的淤血清洗干净。 (2)去除脐静、动脉,制备脐带匀浆。 将清洗干净的脐带组织置于洁净的无菌培养皿中,找到两根脐动脉和一根脐静脉, 沿着脐静脉将脐带组织剪开或撕开,用手术刀将静脉血管粘膜刮弃。去除两根动脉血管,将华通氏胶撕碎,用手术剪剪成匀浆。随后将脐带匀浆转移至50mL离心管中,加入完全培养基至淹没匀浆。 3.接种培养 在T75培养瓶中加入5 mL完全培养基,使培养基能够完全覆盖整个底面即可。将剪碎的组织块按量平均转移至 T75 培养瓶内(大约每瓶1mL匀浆),轻敲培养瓶使组织块分散,晃动培养瓶使组织块在培养瓶中均匀分布,将培养瓶置于37℃、5% CO2培养箱内培养。 *注意事项:培养期间不要晃动培养瓶,以免组织块受到干扰,影响MSC爬出。 4.换液与补液 3天后进行首次换液,之后每3天换液一次。换液时稍微倾斜培养瓶,移除大部分培养基,剩余约1 mL培养基即可,然后沿着瓶壁补充4mL新鲜配制的完全培养基。
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