流式细胞术实验过程+上机流程(视频版🔥 流式细胞术(Flow Cytometry)是一种对悬浮在流体中的微小颗粒进行技术和分选的实验方法。可以检测细胞表面或细胞内分子的表达情况、鉴定和分离不同细胞类型等。 今天我们一起来看一下流式细胞术的实验过程+上机流程吧~ ✅制备单细胞悬液 细胞样品可以直接用刮刀刮下来,组织样品需要剪成小块后用活塞研磨,最后通过200目滤网过滤得到单细胞悬液。 ✅流式抗体染色 今天用的是爱博泰克的Mouse T Cells Panel,直接配色一套使用比较方便,T细胞分群结果也很明显。ABclonal是利用SMab®重组兔单抗技术,开发的ABflo®系列全新兔单克隆流式抗体特异性高、灵敏度高、批次间稳定性好,还有极高的信噪比。 ⚠️需要注意流式上机时设置blank组、单阳组和FMO对照。 Blank就是空白对照或未染色细胞组(不加抗体染色)。 单阳管即单染对照,单阳管可以用细胞,也可以用补偿微球,但是不能混合一管染,细胞也最好是跟样本接近的类型,不要两种相差很大的细胞混合在一起做,如药物处理和未处理的细胞混合做单染 FMO对照(荧光扣除对照,抗体减一对照),建议低表达或连续表达的靶点设置该对照 ✅上机流程 执行完开机流程后,依次上阴性管、单阳管和FMO管,按照文献或者爱博泰克抗体说明书的图圈门和调补偿(防止不同抗体串光)。之后检测实验组即可~ 🔥注意:全程在冰上进行,抗体染色及之后步骤需要避光 #poppy的科研生活 #细胞实验 #流式细胞术 #爱博泰克 #ABclonal
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生物喵3月前
Transwell检测实验流程实验流程: 一、实验准备 1.实验材料Transwell小室、细胞系、基质胶(仅侵袭实验需要)、培养基(含血清和不含血清)、胰蛋白酶、无菌PBS、移液器及枪头、细胞培养板(与Transwell小室配套,一般为24孔板)、离心机、显微镜。 2.试剂配制无血清培养基用于饥饿细胞以同步化细胞周期;含10-20%血清的培养基用于趋化诱导。若进行侵袭实验,需提前将基质胶用无血清培养基按1:5-1:10稀释,置于4℃冰箱过夜融化。 二、细胞准备复苏培养 1.从液氮罐中取出冻存的细胞,迅速放入37℃水浴锅中快速复苏。将细胞转移至含完全培养基的离心管,1000rpm离心5分钟,弃上清,加入新鲜完全培养基重悬细胞,接种至细胞培养瓶,置于37℃、5%CO₂培养箱培养,待细胞长至80-90%融合。 2.细胞饥饿:吸去培养瓶中的完全培养基,用无菌PBS轻轻冲洗细胞2-3次,加入无血清培养基,继续培养12-24小时,使细胞处于饥饿状态,同步化细胞周期。 三、Transwell小室准备迁移实验 1.将Transwell小室放入24孔板中,小室内加入适量无血清培养基润洗,37℃孵育30分钟,弃去培养基备用。 2.侵袭实验:在冰上操作,将预冷的稀释好的基质胶均匀铺在Transwell小室的聚碳酸酯膜上,每孔50-100μl,置于37℃培养箱孵育3-5小时,使基质胶凝固形成一层基质膜,之后用无血清培养基润洗小室,弃去培养基备用。 四、加样接种细胞 1.将饥饿后的细胞用胰蛋白酶消化,1000rpm离心5分钟收集细胞,用无血清培养基重悬细胞,计数后调整细胞密度为5×10⁴-1×10⁵个/ml。在Transwell小室的上室加入200μl细胞悬液,注意避免产生气泡。 2.添加诱导物:在24孔板的下室加入600-800μl含血清的培养基或其他趋化因子作为诱导物,将24孔板放回37℃、5%CO₂培养箱培养。 #实验室日常 #实验 #知识科普 #科研人的精神状态 #科普
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