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生物喵3月前
稳转细胞株筛选实验流程 一、实验准备 1、实验材料 目的细胞系、含有目的基因及抗性基因的表达载体(如质粒)、限制性内切酶、T4 DNA连接酶、感受态大肠杆菌、无内毒素质粒提取试剂盒、细胞培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、抗生素(如嘌呤霉素、G418等,根据载体抗性选择)、Lipofectamine 3000转染试剂、Opti-MEM培养基、六孔板、细胞培养瓶等。 2、仪器设备 离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、酶标仪。 二、载体构建(若已有构建好的载体可跳过此步) 1、获取目的基因 从基因文库购买或通过PCR扩增获取目的基因,设计引物时引入合适的限制性内切酶位点。 2、酶切载体与目的基因 用相应的限制性内切酶分别对表达载体和目的基因进行双酶切,37℃孵育2-4小时。 3、连接反应 将酶切后的载体与目的基因按合适比例混合,加入T4 DNA连接酶,16℃连接过夜。 4、转化大肠杆菌 将连接产物转化至感受态大肠杆菌中,冰浴30分钟,42℃热激90秒,再冰浴2分钟后加入无抗生素LB培养基,37℃振荡培养1小时。 5、筛选阳性克隆 将菌液涂布于含相应抗生素的LB平板上,37℃培养过夜。挑取单菌落进行菌落PCR鉴定,将阳性克隆扩大培养后提取质粒,进行酶切和测序验证。 三、细胞培养 1、复苏细胞 从液氮罐中取出细胞冻存管,迅速放入37℃水浴锅中解冻,转移至含有完全培养基的离心管中,1000 rpm离心5分钟,弃上清,加入适量完全培养基重悬细胞,接种至细胞培养瓶中,置于37℃、5%CO₂培养箱中培养。 2、传代细胞 当细胞密度达到80%-90%时,弃去旧培养基,用PBS冲洗细胞2次,加入适量胰蛋白酶消化液,37℃孵育1-2分钟,显微镜下观察细胞变圆脱落后,加入完全培养基终止消化,吹打均匀后按1:3-1:5的比例传代。 #实验 #医学生 #实验室日常 #科研狗的日常 #科研
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电子试剂第三方检测机构,电子试剂纯度检测 电子试剂检测是保障半导体、集成电路、显示面板等高端电子制造领域材料纯净度、稳定性与工艺兼容性的核心环节。通过系统评估纯度、痕量杂质、颗粒污染、理化特性等关键指标,可验证电子级溶剂、光刻胶、蚀刻液、高纯气体等试剂的适用性,避免金属离子、颗粒、水分、有机残留等杂质导致芯片缺陷、良率下降、器件失效等问题,是产品研发、质量控制、量产交付与工艺稳定的必备依据。 应用场景 晶圆制造、芯片光刻、蚀刻清洗、CMP 抛光、显影剥离、高纯气体制备、超纯水系统、封装材料、PCB 制程、LED 显示、光伏电池、半导体封装、电子元器件清洗、光刻胶配套、湿电子化学品生产 检测范围 电子级异丙醇、电子级甲醇、电子级乙醇、电子级丙酮、电子级双氧水、电子级氨水、电子级氢氟酸、电子级盐酸、电子级硝酸、电子级硫酸、光刻胶、光刻胶显影液、光刻胶剥离液、电子级 NMP、电子级高纯溶剂、电子级蚀刻液、电子级清洗液、电子级高纯气体 检测项目 主成分纯度、水分含量、总有机碳、金属离子、阴离子、阳离子、颗粒计数、粒径分布、电导率、电阻率、pH 值、色度、密度、折射率、沸点、闪点、粘度、表面张力、挥发残渣、热稳定性、光稳定性、腐蚀性、RoHS 有害物质 检测标准 1、GB/T 6682-2008 《分析实验室用水规格和试验方法》 2、HG/T 3805-2021 《电子工业用双氧水》 3、SJ/T 11637-2016 《电子化学品 电感耦合等离子体质谱法通则》 4、SJ/T 11638-2016 《电子化学品中颗粒的测试方法》 5、SJ/T 11290-2020 《光刻胶测试方法》 6、SEMI C12-0709 《液体化学品颗粒污染标准》 7、ASTM D5127-13 《电子级水的标准指南》 8、GB/T 1411-2021 《电子级水中痕量金属的原子吸收分光光度测试方法》 #电子试剂检测 #检测报告 #检测公司 #第三方检测 #检测机构
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