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内源和标签Co-IP实验对照分组设计❗ 如何选择哪种Co-IP❓ 2句话帮你快速定~ ✅追求结果的生理真实性和可靠性,还有好用的内源性IP抗体,那必须冲内源性 Co-IP!这可是证明蛋白天然互作的 “金标准”,稳得很~ ✅ 要是想快点筛结果、研究功能域/突变体,或者内源性抗体不好用甚至压根没有?选外源性 Co-IP就行!灵活又好操作,完全能满足需求。 💕Co-IP实验对照设计: ✅内源蛋白Co-IP:对照组加入与实验组抗体同种属的IgG,实验组加入目标蛋白IP级别抗体; ✅标签蛋白Co-IP:对照组是转染相应的空载体,实验组是转染融合特定标签的目标蛋白过表达质粒; 💕Co-IP大致实验步骤: ✅内源蛋白Co-IP:总蛋白提取→Input样品制备→总蛋白与抗体孵育→proteinA/G磁珠与抗体结合→蛋白洗脱→WB检测/质谱鉴定。 ✅标签蛋白Co-IP:质粒转染→总蛋白提取→Input样品制备→总蛋白与Flag磁珠孵育→蛋白洗脱→WB检测/质谱鉴定。 ❗附上实验中的一些小tips: 1️⃣ 磁珠预处理(关键步骤,目的是除去磁珠的保存液); 2️⃣全程冰上操作,IP裂解液加蛋白酶抑制剂,防止蛋白降解; 3️⃣孵育时间(这个孵育时间需要根据你目的蛋白的一个表达水平或者是抗体一个亲和力来进行确定); 4️⃣ 安利辉骏生物标签纳米抗体磁珠,完全避免抗体轻重链污染💯,质谱鉴定互作分析结果可信度高。 💕ps:有需要Flag/HA/V5/GFP/RFP标签纳米抗体磁珠以及Co-IP试剂盒的小伙伴可以联系我们@辉骏生物 ~同时我们还提供IP-MS、pull-down MS质谱鉴定服务!#coip #免疫共沉淀 #蛋白互作 #科研 #研究生
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