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土壤淀粉酶活性的测定 测定意义: 淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。 测定原理: 淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与3.5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在 508nm 处有特征吸收峰颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。 试剂盒组成: 试剂一:液体25ml 保存温度4℃ 试剂二:液体8ml 保存温度4℃ 试剂三:液体30ml 保存温度4℃ 说明书一份 试剂二:液体 8mlx1瓶,4℃保存。若出现沉淀析出,需70℃加热溶解后再用 自备仪器和用品: 天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1ml玻璃比色皿、甲苯 测定操作: 测定管:土样0.1g 、甲苯 30μl、25°C静置15min、试剂一250μl、试剂二300μl、充分混匀,37℃震荡1h,8000rpm,25℃,离心10min、上清液500μl、试剂三500μl、充分混匀,90℃水浴 5min,待冷却后,用蒸馏水调零,于1ml玻璃比色皿中测定 508nm 各管吸光值,记为A 测定管。 对照管:土样0.1g 、甲苯 30μl、25°C静置15min、试剂一550μl、试剂二不添加、充分混匀,37℃震荡1h,8000rpm,25℃,离心10min、上清液500μl、试剂三500μl、充分混匀,90℃水浴 5min,待冷却后,用蒸馏水调零,于1ml玻璃比色皿中测定 508nm 各管吸光值,记为A对照管。 计算公式: 标准曲线:=0.2525x-0.034,R2=0.9917 酶活单位定义:每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。 S-AL (mg/d/g鲜重)=(△A+0.034)÷0.2525×V反总÷W÷T =52.32×(△A+0.034)÷W V反总: 反应体系总体积,0.55ml; T: 反应时间,1/24d; W:样本质量,g; △A=A测定管-A对照管。
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