新手教程细胞铺版来啦 今天聊一下细胞铺板以及细胞计算等相关注意事项。 (文字版教程更详细)👍 1️⃣实验之前先开紫外40min,提前从4℃取出PBS,胰酶,完全培养基,置于室温。 2️⃣桌面酒精消毒,开酒精灯,把所需试剂喷好酒精置于超净台。培养瓶瓶口过一下酒精灯,吸弃旧培养基,向培养瓶中加入5ml的PBS,轻轻摇晃,缓慢吹打,之后弃去PBS。这个过程需要重复2-3次。 3️⃣接下来加入2-3ml胰酶消化,轻轻晃动,计时器设置合适的消化时间,置于显微镜下观察消化状态,镜下观察细胞变圆,加入2ml完全培养基终止消化,枪头反复缓慢吹打液体,吸出液体移入15ml离心管,按照800rpm, 5 min离心。(注意配平) 4️⃣离心结束后,拿出离心管,喷酒精,置于超净台,倒出上清液,向管中加入1-4ml完全培养基,充分混匀。 5️⃣取一个2ml离心管,先向管中加入90ul细胞悬液,再加入810ul完培,最后加入台盼蓝100ul,充分摇晃,吸取10ul打入细胞计数板,进行计数。 6️⃣计数结果是502,那溶液浓度就是502÷4÷0.9×10=1394×10^4(个细胞/ml)=1.394×10^7(个细胞/ml)因为我想要在96孔板每孔铺6000个细胞,每孔100ul,那目的浓度就是6w个细胞/ml,相当于我要把细胞悬液稀释232倍。 7️⃣接下来让我们把细胞悬液配置到目的浓度,我一共要铺120个孔,每个孔100ul,所以我取了60ul细胞悬液和13.86ml完培,总体积是13.92ml。 ‼️铺板的总体积不要算的可丁可卯的,要留出来一部分富裕。 ‼️注意铺板时一定要充分混匀悬液,铺一次或者两次就混匀一下,尽量减小孔与孔之间的差异。 ‼️别忘了设置无细胞组(完培组) 8️⃣最后把96孔板四周都加上一圈PBS,之后就放入培养箱就可以啦。 #细胞实验 #细胞培养 #生物医学科研 #细胞 #实验室日常
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