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BCA法测蛋白浓度✅视频版🔥 做western blot前一般会简单测一下蛋白浓度确保上样量一致。或者是测TC、TG等生化试剂盒用蛋白质量均一化。今天我们一起来看一下BCA法测蛋白浓度~ ✅准备试剂和样品 准备BCA试剂、标准蛋白溶液和待测蛋白样品。配制BCA试剂工作液,通常是将试剂A和试剂B按50:1的比例混合。像BCA、qPCR这类半定量或定量实验我们一般会用Eppendorf的移液器,保证每一次吸液的准确性。 ✅设置标准曲线 取一系列标准蛋白浓度溶液,将各标准溶液分别加入96孔板的标准孔中。Eppendorf Research 3 neo移液器“Fast快档”可以,快速调节体积,加样的时候省时又省力[哇R] ✅添加样品 将待测蛋白样品稀释到合适浓度,加入96孔板的样品孔中,确保每个孔中的样品体积一致。一般我们会做3个复孔~ ✅加入BCA试剂 向每个标准孔和样品孔中加入等量的BCA试剂工作液,轻轻晃动平板,使试剂与样品充分混合。 ✅孵育 将平板放入37°C的恒温箱中孵育30分钟。孵育过程中,蛋白与BCA试剂反应生成紫色复合物。 ✅测定吸光度 使用酶标仪在562 nm波长下测定各孔的吸光度。记录所有标准孔和样品孔的吸光度值。 ✅绘制标准曲线 以标准蛋白浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。使用回归分析确定标准曲线的方程。 ✅计算样品浓度 根据标准曲线方程,将样品的吸光度代入标准曲线方程,得到对应的蛋白浓度。 #eppendorf #艾本德 #实验室日常 #科研日常 #移液器
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