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人脐带间充质基质细胞(hUC-MSCs)冻存实验 #细胞培养基 #细胞冻存 #达科为 #达优 #细胞培养 1.准备工作 配制完全培养基:提前将GF20 Plus MSC Xeno-Free SFM (Cat#6914132/6914142)平衡至室温,按照M200无血清培养基:F20 Plus MSC添加物=50:1的体积比例配制(使用量按需配制即可)。 取部分配制好的完全培养基、细胞程序降温冻存盒、无血清细胞冻存液(Cat# 6032011)放入4℃热平衡。 将备用的细胞冻存管做上详细的记号,随后放入-20℃热平衡。 2.细胞冻存 参考细胞传代流程对要冻存的细胞进行消化、计数。 (冰上操作)根据细胞计数的结果,往细胞沉淀中加入4℃平衡过的细胞培养基进行重悬,使细胞浓度调整到两倍的冻存浓度(比如想要冻存的细胞浓度为1 ×10^7 cells/mL,就用培养基将细胞浓度调整到2×10^7 cells/mL),然后将细胞吹打均匀。 (冰上操作)往细胞悬液中缓慢逐滴加入等体积的、已4℃平衡过的细胞冻存液,轻轻混匀。 (冰上操作)以每管1 mL细胞悬液的量,将其分装入已在-20℃热平衡过的冻存管中,将冻存管的盖子拧严实。 立即将冻存管放入已经在4℃平衡过的细胞程序降温冻存盒中,然后将冻存盒放入-80℃冰箱内,也可以将冻存管放于程序降温仪中,以1℃/min的速率降温到- 80℃。 24h后,把-80℃保存的冻存管转移到液氮罐中。
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新手教程细胞铺版来啦 今天聊一下细胞铺板以及细胞计算等相关注意事项。 (文字版教程更详细)👍 1️⃣实验之前先开紫外40min,提前从4℃取出PBS,胰酶,完全培养基,置于室温。 2️⃣桌面酒精消毒,开酒精灯,把所需试剂喷好酒精置于超净台。培养瓶瓶口过一下酒精灯,吸弃旧培养基,向培养瓶中加入5ml的PBS,轻轻摇晃,缓慢吹打,之后弃去PBS。这个过程需要重复2-3次。 3️⃣接下来加入2-3ml胰酶消化,轻轻晃动,计时器设置合适的消化时间,置于显微镜下观察消化状态,镜下观察细胞变圆,加入2ml完全培养基终止消化,枪头反复缓慢吹打液体,吸出液体移入15ml离心管,按照800rpm, 5 min离心。(注意配平) 4️⃣离心结束后,拿出离心管,喷酒精,置于超净台,倒出上清液,向管中加入1-4ml完全培养基,充分混匀。 5️⃣取一个2ml离心管,先向管中加入90ul细胞悬液,再加入810ul完培,最后加入台盼蓝100ul,充分摇晃,吸取10ul打入细胞计数板,进行计数。 6️⃣计数结果是502,那溶液浓度就是502÷4÷0.9×10=1394×10^4(个细胞/ml)=1.394×10^7(个细胞/ml)因为我想要在96孔板每孔铺6000个细胞,每孔100ul,那目的浓度就是6w个细胞/ml,相当于我要把细胞悬液稀释232倍。 7️⃣接下来让我们把细胞悬液配置到目的浓度,我一共要铺120个孔,每个孔100ul,所以我取了60ul细胞悬液和13.86ml完培,总体积是13.92ml。 ‼️铺板的总体积不要算的可丁可卯的,要留出来一部分富裕。 ‼️注意铺板时一定要充分混匀悬液,铺一次或者两次就混匀一下,尽量减小孔与孔之间的差异。 ‼️别忘了设置无细胞组(完培组) 8️⃣最后把96孔板四周都加上一圈PBS,之后就放入培养箱就可以啦。 #细胞实验 #细胞培养 #生物医学科研 #细胞 #实验室日常
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人脐带间充质基质细胞(hUC-MSCs)传代培养实验 #细胞培养 #科研实验 #细胞培养基 #达科为 #达优生物 1.配制原代培养完全培养基 提前将hMSC原代培养增强剂(Cat#6122133)和GF20 Plus MSC Xeno-Free SFM (Cat#6914132/6914142)平衡至室温,按照M200无血清培养基:F20 Plus MSC添加物:hMSC原代培养增强剂=50:1:1的体积比例配制(使用量按需配制即可)。 2.脐带处理 (1)清洗脐带。 在无菌环境下取出新鲜脐带组织,置于洁净的无菌培养皿中,倒入加有1%青霉素-链霉素溶液(100×)的DPBS(Cat#6062011),清洗脐带表面,并使用止血钳向下挤出淤血。期间需更换DPBS、重复操作3-4次,尽量将淤血清理干净。 随后用手术剪将脐带剪成合适的长度,转移到新的培养皿中,加入不含双抗的新鲜DPBS溶液,再次将脐带组织的淤血清理干净。 将脐带转移到装有DPBS(不含双抗)的50mL离心管中,来回颠倒,多次洗涤,尽量将脐带内的淤血清洗干净。 (2)去除脐静、动脉,制备脐带匀浆。 将清洗干净的脐带组织置于洁净的无菌培养皿中,找到两根脐动脉和一根脐静脉, 沿着脐静脉将脐带组织剪开或撕开,用手术刀将静脉血管粘膜刮弃。去除两根动脉血管,将华通氏胶撕碎,用手术剪剪成匀浆。随后将脐带匀浆转移至50mL离心管中,加入完全培养基至淹没匀浆。 3.接种培养 在T75培养瓶中加入5 mL完全培养基,使培养基能够完全覆盖整个底面即可。将剪碎的组织块按量平均转移至 T75 培养瓶内(大约每瓶1mL匀浆),轻敲培养瓶使组织块分散,晃动培养瓶使组织块在培养瓶中均匀分布,将培养瓶置于37℃、5% CO2培养箱内培养。 *注意事项:培养期间不要晃动培养瓶,以免组织块受到干扰,影响MSC爬出。 4.换液与补液 3天后进行首次换液,之后每3天换液一次。换液时稍微倾斜培养瓶,移除大部分培养基,剩余约1 mL培养基即可,然后沿着瓶壁补充4mL新鲜配制的完全培养基。
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什么是组培什么是脱毒 前几天我发了一个视频。介绍了99成中无菌系统, 可以做中药材,花卉。 草莓,生姜,大蒜,马铃薯土豆。脱毒组培。大家都十分感兴趣,今天我就给大家介绍一下。 种药材、种花卉、搞育苗的朋友们,你是不是一直搞不懂**组培和脱毒**到底有啥区别?很多人一听一看说是主陪,那是十分高大上的,今天我用大白话一次性给你讲透, 首先说什么是组培,说白了就是植物克隆。就是无性繁殖,就是扦插。在无菌环境下,取植物一小块芽或者枝条茎尖,放到专用培养基里恒温培育,批量复制出一模一样的苗子,这就叫组培苗。它只负责扩繁育苗、保留品种,但不一定能去掉病毒**。 那什么是脱毒?脱毒是**升级版组培。专门选取植物最顶端的生长点,牙心部分。这个部位基本。不带病毒,通过专业技术剔除种苗体内潜藏的病毒和病菌,培育出来的都是无病壮苗,长势旺、不退化、产量品质都翻倍。 简单总结:一句话,脱毒之后。再组培克隆扩大。九九成功无菌操作系统,普通的百姓。在家里就可以做托毒。主牌。你想弄哪个品种就弄哪个品种。你想试一试吗?可以评论区聊聊你的想法,新手不懂的也没关系,有啥疑问直接留言,我一一给你解答。#什么是主陪 #什么是脱毒#脱毒和组培有什么区别#
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