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微生物纯种培养的核心目的与常用类型及关键操作步骤! 纯种培养是微生物学实验的基础操作。微生物纯种培养,简单说就是从含有多种微生物的样品中,分离、培养出单一菌种的过程,目的是获得遗传背景一致的微生物群体。 一、核心目的 研究单一菌种特性:只有纯培养物,才能准确研究该微生物的形态、生理生化反应、代谢途径等。 应用需求:工业生产(如发酵)、医学诊断(如鉴定致病菌)、农业应用(如筛选固氮菌)等,都需要使用纯种微生物以保证效率和安全性。 菌种保藏与交流:科研中保藏的标准菌株,以及实验室间交流的菌种,都必须是纯种。 二、关键操作步骤 纯种培养主要通过“分离”和“纯化”两个核心环节实现,最常用的方法是固体培养基分离法。 样品处理:根据样品(如土壤、水、食品、人体分泌物)的不同,采用稀释、均质、离心等方式,使微生物均匀分散。 接种与分离:这是获得纯种的关键步骤,常用两种方法。 涂布平板法:将稀释后的菌液均匀涂布在固体培养基表面,培养后形成单菌落。 划线分离法:用接种环蘸取少量菌液,在固体培养基表面连续划线,随着划线次数增加,菌量逐渐减少,最终可形成单菌落。 培养:将接种后的培养基放入适宜温度的培养箱(如细菌常用 37℃,真菌常用 28℃),根据微生物的需氧特性选择有氧或厌氧环境。 纯化与验证:从平板上挑取形态特征一致的单菌落,接种到新鲜培养基上进行纯培养。之后可通过显微镜观察形态、进行生化反应测试等,验证其纯度。 三、常用培养基类型 不同微生物对营养需求不同,选择合适的培养基是成功培养的前提。 培养基类型 特点 应用举例 基础培养基 营养成分全面,适合大多数微生物生长 牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌) 选择培养基 加入特定物质,抑制杂菌生长,只允许目标菌生长 高盐培养基(筛选金黄色葡萄球菌) 鉴别培养基 加入特定试剂,使不同微生物形成不同特征的菌落 伊红美蓝培养基(鉴别大肠杆菌) 四、关键注意事项 无菌操作:整个过程必须在无菌环境(如超净工作台)中进行,接种环、培养基等需彻底灭菌,防止杂菌污染。#微生物菌种查询网 #微生物菌种培养 #实验室日常 #知识科普 #微生物
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qpcr实验步骤 qpcr实验步骤视频版 qPCR实验通过ΔΔCT法计算出flod change从而得到RNA在不同处理下的表达情况。那么实验过程是怎么样的呢?今天我们跟着视频一起来看一下吧~ 实验准备 提前准备好cDNA(模板)、引物、SYBR mix、ddH20、耗材等 Tip:在冰箱里长期放置的试剂会挥发或析出沉淀导致液体不均匀,所以试剂都需要先涡旋混均后离心才可以打开使用~在使用时候要记得轴对称配平和拧上保护盖哦~ 试剂配制 一般情况下配制20uL体系进行qPCR实验,为了节省试剂和样品,也可以配制成10uL体系哦~因为需要配制复孔(技术学重复)以减小误差,所以可以先将除了cDNA以外的试剂配完,分装到PCR板上,再逐一添加cDNA 试剂 体积 2x SYBR mix 5ul 引物F/引物R 0.25ul/0.25ul ddH20 2.5ul cDNA 单独加入2ul PCR布板 每一行连续的三个孔(如A1、A2、A3)作为技术学重复,加入一模一样的体系和cDNA。可以在板子上先每三个画一条竖线区分。 给大家分享一个小技巧,做qpcr实验结果想要稳定就需要加样准确无误差的移液器,比如我们实验室就会单独放在一个实验台只进行定量实验,加样的时候可以边加样边抬手,让液体自然靠近pcr板,这样能够减少组内差异哦。 上机过程 数据计算 得到qPCR结果后,去除不符合实验要求的孔(点击omit),在三组生物学重复中使用ΔΔCT法计算相对表达量。可以在表格里直接计算哦~ #实验室日常 #科研学习 #细胞培养 #生物医学科研 #细胞实验 #医学实验
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