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Ch-IP实验样本如何制备?细胞、动物、植物样本第一步怎么做 ChIP实验能不能成,很多时候从样本准备就定了调性🧬 细胞状态不好、组织没速冻、送样量不够…… 每一个小细节,都可能让后面的抗体孵育、测序分析“白忙一场”。 今天用一张表,帮你理清三类常见样本的准备标准📋 🔬 细胞样本 • 样本量:500万以上 • 保存方式:冻存细胞,-80℃保存 • 关键操作: ➕ 收集细胞,4℃离心 ➕ PBS清洗(注意:不含Mg²⁺和Ca²⁺) ➕ 加入冻存液重悬,分装至冻存管 ➕ 程序降温:4℃ 10min → -20℃ 30min → -80℃ 过夜 → 转液氮长期保存 • 寄送:干冰寄送,细胞活率85%以上 🐭 动物组织 • 样本量:3g以上 • 保存方式:液氮速冻,-80℃保存 • 关键操作: ➕ 新鲜组织用PBS洗去残留血液,剥去脂肪、筋膜 ➕ 切成1cm²小块,装入螺旋冻存管 ➕ 液氮速冻30min以上,-80℃保存 • 寄送:干冰寄送,黄豆大小即可 🌱 植物叶片 • 样本量:幼嫩叶片5g以上,其他10g以上 • 保存方式:液氮速冻 • 关键操作: ➕ PBS或无菌水清洗,吸干表面液体 ➕ 锡箔纸包好,装入冻存管 ➕ 液氮速冻30min以上,-80℃保存 • 寄送:干冰寄送,冻存前称量足量 💎 特别提醒 对于转录因子这类比较“娇气”的蛋白 建议先交联再送样—— 这一步对成功率提升非常关键✨ 样本准备是ChIP实验的“地基” 地基稳了,后面的结果才站得住脚~ #金开瑞 #金开瑞生物 #分子互作 #免疫共沉淀 #实验外包
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ChIP实验流程解析,导师不教也得会的必备技能! ChIP实验到底怎么做? 从细胞/组织样本,到拿到蛋白结合的DNA片段,中间要经过哪些关键步骤? 今天带你走一遍标准流程🧬 🔬 第一步:样本处理——不同来源,方法不同 • 细胞样本:约1x10⁷个细胞,收集后裂解 • 动物组织:3g以上,先研磨再裂解 • 植物组织:幼嫩叶片0.5g或根茎3-5g,液氮研磨 裂解缓冲液中记得加蛋白酶抑制剂,保护蛋白不被降解。 🧪 第二步:交联——把蛋白和DNA“锁”在一起 用1%甲醛室温处理10-15分钟,让蛋白和DNA“绑定”。 ⚠️ 时间别太长!过长会导致抗原表位被遮蔽,影响抗体识别。 交联完成后,加甘氨酸,终止反应。 ⚡ 第三步:超声打断——把染色质切碎 这一步很关键! 参考条件:功率50W或18%,开1秒/停1秒,总时长15分钟左右。 打断后目标片段大小: • ChIP-qPCR:200-700 bp • ChIP-seq:300 bp左右最佳 打断不均匀,后续免疫沉淀和数据分析都会受影响。 🎯 第四步:免疫沉淀——用抗体“钓”出目标 利用抗原-抗体特异性识别,将目的蛋白结合的DNA片段沉淀下来。 抗体质量是成败关键,务必选ChIP验证过的抗体。 📦 第五步:解交联与DNA提取 逆转交联,释放DNA片段,纯化后得到ChIP-DNA。 下一步:已知靶点做qPCR验证,全基因组范围探索做测序。 每一步都藏着影响结果的细节 掌握流程,让ChIP实验更顺利✨ #金开瑞 #生物 #实验 #科研 #实验室
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Co-IP实验详细步骤➕tips❗ ✅Co-IP操作关键点 样本制备:总蛋白提取; Input制备与检测:目标蛋白表达分析; 免疫共沉淀 :“总蛋白-抗体-protein A/G磁珠”孵育; 洗涤:漂洗次数; 洗脱:非变性和变性法; 检测:WB和质谱。 ✅Co-IP中的一些实验小tips: ①样本处理:裂解液加足量的蛋白酶抑制剂,防止蛋白降解 ; ②孵育温度:磁珠与抗体复合物孵育需全程 4℃,避免室温孵育导致非特异蛋白结合增多,增加背景干扰 ; ③抗体:一抗分装-20℃冻存,避免反复冻融 ; ④检测对照:内源IP需设 Input、IP、IgG 对照组;信号弱可加增加上样 5-8μL 或适当延长曝光。 如何选择哪种CoIP❓ ✅追求结果的生理真实性和可靠性,还有好用的内源性IP抗体,那必须冲内源性 Co-IP!这可是证明蛋白天然互作的 “金标准”,稳得很~ ✅ 要是想快点筛结果、研究功能域/突变体,或者内源性抗体不好用甚至压根没有?选外源性 Co-IP就行!灵活又好操作,完全能满足需求。 💕如果您在做IP过程中碰到了抗体轻重链污染问题,我们还能帮您解决麻烦: ①标签Co-IP:选择标签纳米抗体磁珠(Flag,HA,V5,GFP,RFP可选); ②内源Co-IP:选择IP专用二抗。 有需要的同学们可以联系我们辉骏生物~ ps:我们还提供Co-IP试剂盒以及IP-MS、pull-down MS质谱鉴定服务~~若您在蛋白互作实验上还有疑问,欢迎咨询我们。#科研 #科研日常 #coip #实验室日常 #辉骏生物
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