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太长不看版: 🔬 现在常用的就是PCR和RT-qPCR。 🧬 PCR:目的是扩增目的DNA片段,得到DNA产物。后续一般会跑琼脂糖凝胶电泳进行纯化,或者进行酶切酶连等分子生物学实验。 📊 RT-qPCR:目的是对某个mRNA进行定量测定。RT指的是Reverse Transcription,先把细胞里提的RNA逆转录为cDNA。q指的是Quantitative,指在PCR的基础上加入荧光标记探针或染料,实时监测每个循环中扩增的DNA量。跑完以后一般把样品直接扔掉,分析数据计算目的基因的表达量。 下面是详细介绍: 🧬 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应) • 目的:扩增特定的DNA序列。 • 原理:利用DNA聚合酶在特定温度循环下(通常是95°C变性、55°C退火、72°C延伸)复制目标DNA片段。 • 应用:基因克隆、DNA指纹图谱、病原体检测等。 📈 qPCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction,定量聚合酶链式反应) • 目的:定量分析DNA序列的拷贝数。 • 原理:在PCR基础上加入荧光标记探针或染料,实时监测每个循环中扩增的DNA量。 • 技术:使用SYBR Green染料或TaqMan探针等。 • 应用:基因表达分析、病原体定量、遗传突变检测等。 🧪 RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,逆转录聚合酶链式反应) • 目的:从RNA模板扩增cDNA。 • 原理:首先使用逆转录酶将RNA转录为cDNA,然后利用DNA聚合酶进行PCR扩增。 • 应用:检测特定mRNA的表达、基因表达分析等。 📊 RT-qPCR(Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction,逆转录定量聚合酶链式反应) • 目的:定量分析RNA序列的表达水平。 • 原理:结合了RT-PCR和qPCR的技术,先逆转录为cDNA,然后进行实时定量PCR。 • 技术:使用SYBR Green染料或TaqMan探针等,实时监测cDNA的扩增。 • 应用:基因表达的定量分析、miRNA表达分析、病原体RNA定量等。#科普 #医学 #实验 #研究生 #实验室日常
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