flowjo流式数据怎么改颜色

我们现在是已经把数据导进了我们 photogo 的主界面，然后我做了这个就是 c d 八和 c d 二十五的点图，就是 p c 五点五和 p e c y 七的点图，留着一会儿备用，然后我们双击前面这个九宫格， 进到我们调补偿的这么一个界面，就是这个界面，然后现在这个状态呢，它是不能调补偿的，它是不能编辑的，然后我们需要点这里点击编辑，然后进到一个可以编辑的这么一个补偿的界面， 然后我们看一下下面的图，现在这个图呢，他蓝色的是没有调补场的，黑色才是调补场的，那我们看一下黑色的是调补场的这个图呢，因为我们这是做的六色，所以这个图还是有点多，而且这个图小，大家看到没，这个是一个比较小的图，他不是很好看我们这个补场的变化，所以呢， 我拉了这么一个大图放到这里，那我们来看一下，我们先大体的浏览一下有些什么需要调补场的地方没有，那我们看一下这个图，他可能有有一点偏，这个图也也有一点偏，对吧？那我们就来看一下， 我们先看这个图，它的这个图呢，重坐标是 p e c y 七， 横坐标是 a p c c y 七，那我们来找一下这个图，那我这边呢，横坐标是 p c y， 器重做标识， a p c c y 器。看大图上我们就很清楚，这边这群细胞有一点往上斜，对吧？那我们在这边来找 我们这个需要调的是什么呢？我们需要调的是 a p c c y 七对 p e c y 七的补偿。那我们到这边来看 a p c c y 七对 p c y 七的补偿，这个我们放大了看一下，这大了看一下这个这个矩阵，然后我们它原来是三点七，那我们把它改改到四，我们看一下 他有没有改变，好像没有啥大的变化，那我们继续改改他， 好，现在我们改到八，大家看这个上挑的就是倾斜的这群细胞已经下来了，然后这边这群还有一点点斜，那 我们这群又调什么呢？我们这群调的是 p e c y 七对 a p c c y 七的补偿，那就是 p e c y 七，这边 p e c y 七对 a p c c y 七的补偿，那就是这个地方，这个地方那我们先调一个零点五看一下， 这边基本上没有什么太大的改变，那我们就再继续调， 大家看实际上上面这群基本上这个这个飘的，这个散的基本上没有大的变化，但是这群细胞已经明显的移过来了，对吧？那我们这个不散也就算完成了，嗯，这个呢就是我给大家就是用这个 一个样本给大家简单的讲一下哈，就是手动补偿，就是这个样子。然后今天早上群里呢有同学在说做的 jc one 是双标的抗体四级盒，就是双标的四级盒，他没办法调那个单元的补偿。那么你到这个 photo 里面呢，也可以用合人的这管 我们对应的一个图，每一个图这样来调补偿是可以的哈。嗯，今天就讲到这里，还有什么需要？嗯，问的有啥问题，大家在群里就是积极的提问，我都会回答的哈。

今天我们讲一下，嗯， photo 分析单参数封图的这么一个操作。首先呢我们把样本导入到 photo 的这个主界面，然后 点击一个样本，点出 f s s s 点图，然后画主细胞群诺的门， 画好眉以后呢，我们还是一样的 双击这个门，然后在这个图上我们横轴呢，就是我们标记的 marker 中轴呢，我们选择的这个 has 好，现在我们这个坐标图出来了，然后我们给他画一个 先进门，然后我们调整一下这个门的位置，这里调整了一会每一个样本的时候还是会继续调哈，然后 复制粘贴到复制到这个组间，大家看哈这个组间或者是 there 粘贴到每一个样本，那现在我们把门都复制到每一个样本了，我们再来看一下我们的细胞群落，是不是每一个样本的细胞群落是不是都在我们的门里，那这个我们的这个细胞群有点靠底线了，那我们要调整一下重轴的这个细胞群落的位置， 像现在这样，我们的这个细胞群就在我们的门里了，我们再检查下面一个， 好，五个这个图细胞都在我们的门里。那我们还要继续检查我们的风图，风图呢，也要调整一下每一个样本这个门的位置，因为我们每一个样本它的这个阳性风在的位置是不同的， 大家看我们只要点一下这个向右的这个箭头，他就自然跳到下一个样本。 好，现在我们把每一个样本检查完了，那我们现在要把数据导出来，我们可以把这个图关掉， 我们现在点 table， table 点了以后呢，我们要把这两个门就是我们设数据的这两个门， 要把它拉到我们的这个 table 的图上中间去。好，现在门出来了，我们点这个 p 处理好， p 处理点了，大家看我们的这个数据就出来了， 看我们这个一二三四五个样本，加上我们的对照，然后我们的数据都出来了哈，然后这个 table 数据出来了，我们还要 画图，对吧？我们流失不能没有图，那我们图呢？点 nat 好，点了这个图呢？我们要把我们的这些逻辑门都拉到 涂上来。好，我们调整一下这两个门的位置，就是说我们这两个门呢来看不能压到这个虚线，因为他这每一个虚线是一页。好，我们现在把这个图调整一下位置哈，调整一下位置，然后 我们主要是要的是这个封图，对吧？我们要把这封图给套叠在一起，那我们把下面这个样本的封图拉到我们这个对照的这个封图上去， 我们把每一个样本的封图都拉到这个图上套叠在一起。 好，图拉过来了，那我们把这个 not 打开看，我们这边就有我们的这个样本表，那我们把这个样本表拖到封图下面来。好，那这就是我们做嗯，单封的这么一个分析的过程哈。

除了旧软件分析数据之后呢，我们需要做的就是将分析好的这个结果进行导出了，那首先选择这个 table it 的打开它将这个逻辑关系拖动到 table it 的中， 就会将我们所有的结果直接一次性以表格的形式去导出，可以将这个表格保存为一个 cl， 来进行我们进一步的数据统计学分析。 那么除了我们的这个数据之外呢，我们还要去看这个图像对不对？那么图像呢导出就是打开雷奥的 id 的这个地方，将我们的逻辑关系朝里面去拖动 之后呢，我们一样也可以用这个亏的搬出去 pot， 将我们所有的样本一次性的批量导出，保存这个雷奥的 id 的，他的用途其实非常强大，大家看到他这里其实也有各种各样的，比如圈门啊，或者 划线呀等等，所以其实我们在雷奥特里面是可以实现我们接近百分之八十的这种，后面可能要使用什么佛祖笑话等等一系列的这种工具的修饰的方式，是一个非常强大平台。 那讲到这里，我们所有的杨姐基本上也就到这里告一委声了，下一期我们会给大家带来更加进阶的内容，也希望能够帮助到大家，让大家的流逝更加顺利。

今天讲的是我们图像的问题，那其实我觉得我们图像就是首先要知道怎么样去滑图像，还原到跟文章里面的图是一样的，这个涉及到我们用福多就这个软件对流式结构优化， 这是一个非常重要的事情啊，如果你修正优化的不好，放到文章里面，含金量也是大打折扣的，可能展示的不好，最后错失良机。 佛罗就有哪些可以图像优化的功能，第一个呢，我们可以通过佛罗就添加减少通道的范围，那我们看下面这张图里面啊，他有这么大的空白，散散的细胞没什么用的， 而真正我们主要感兴趣的细胞，它被压在特别小的一个左下角的范围之内。那怎么样去添加减少通道范围呢？我们这个大写的字母 t， 大家看到 啊，你把这个图像的这个大写的 t 点击左键还有一个用户自定义选项，点击用户自定义， 那我们可以通过他下方这里的加号和减号让他放大或者缩小，那我们当然是希望这个空白区域缩小了， 所以我们这里就直接点击这个右侧剪号之后他就会把空白区域剪除掉，再点击要拍整个图放大之后非常清晰的两个细胞亚群呈现的更好。我们有的仪器上机的时候，他的上线是十的七次方，不多，就上面默认只会展示到十的五次方， 那这个时候百分之五十一的疑问词是这个在边界，我们可以通过刚刚的这种方法点击进入自定义参数轴，我们点加号就行了。那通过放大之后呢，再去点击 app， 所以我们讲啊，你的这个数据拿到电脑上，打开服务，就把这里面的每一个通道都 切开一遍，这样我们才能够去获得一个比较完整美观的流失结果。第二个呢啊，我们讲上述呢，只是呈现它的结果， 要怎么样去让这个结果去展现的更好呢？我们佛罗就的这个自定义参数轴里面，他有个选项，这里很多类别他都是有特殊的用法的，我们要做细胞周期的实验，因为他是线性分布的，选的另轴会更好一点点。 入武仪器是些比较特殊的老款仪器，比如每天你用每天一种必备，开一本的话，他一般都只能用 love you， 这个是需要注意的，我推荐大家选择 bi ex 这种双指数轴，相对而言这个细胞呈现的结果会更准确啊，为什么这么说呢？ 假如我这个电压调的比较低，那是会有一部分细胞压到零以下的，这种情况下，如果我开了双指数轴，这个音信群相比于刚刚就是可以直接比较好的完整的展示出来了。 当然其实一个初始的结果并不是很好看，我们是需要对这个双指数的参数进行调节的。 那怎么去调节它呢？第一个装指数轴，它的这个轴宽度调节阴性的范围，其实看到他的阴性细胞群就有点压缩，羊群有点放大，也并不是特别的完美， 可以调节阳性轴的范围，让他的阴性轴的荧光宽度和阳性轴的荧光宽度尽可能达到等宽。那这个时候我再去应用之后，是不是就显得更加匀称好看了呢？这样阴性、阳性甚至是弱阳性的这个结果就会 分布的更加均匀。还可以通过音信群的缩放效应将整个音信群进行缩放，人为的把 spa 的效应减少，相对而言更好看，用于实验结果的美化。

我们大家都期盼着我们钟声敲响以后，我们新的一年给我们带来新的 see you all， let's go to see the。

本次视频为大家介绍下如何利用福欧洲软件分析多因子定量检测 cba 世纪的流失结果。 我们在开始分析数据前，要先安装一个 flow 轴，分析 cba 数据所需要的插件。打开 flow 轴 的官方网站，在 download 选项里点击 plugins 弹出的页面中搜索 cba， 找到对应插件，点击右下角按钮进行下载。 解压缩下载好的安装包，在解压文件中找到 jr 尾坠的文件， 复制到 florido 安装文件路径下的 products 文件家中。 打开 florida 软件，点击工作界面右上角的新型图案及 florida 的属性 设置按钮。在弹出的界面中选择右下角的 dealt nastics 选项，这时会再弹出一个设置界面，界面中最下方关联一下插件保存的路径，点击 ok 后重启下软件即可完成安装 插件就可在 workspace 选项卡中的 plugins 选项里找到了。 分析数据前需对软件进行一些参数的调试，我们依然是点击工作界面右上角的新型图案， 在弹出的界面中选择右下角的 set matters 选项。在新弹出的选项卡中，由我们常见的流失仪器品牌及型号，选中实验所用的流失疑惑仪器品牌进行相关参数设置。因本次演示数据为 bb swift 仪器所的数据，所以我们 就在左侧仪器栏中选中对应的 bdc， 一切取消右侧软件默认的做标轴自动识别的参数设置。将最大值改为十的六次方。如果是赛特、 flex 等仪器的数据，一般要将最大值改为十的七次方，更改后点击 ok 退出。 我们在正式开始分析数据前，为了方便插件对数据的准确自动识别，我们还需先手动额外对原始数据进行圈门操作来排除样本背景信号的干扰。首先将原始实验数据拖入 flow 轴分析界面， 双击点开任意一个样本，在 fscfsc 的双参数图中，手动圈出 bis 所在的主群体位置，并将圈门应用到 到所有样本中。接下来再双击打开 beats 门内的数据，切换横坐标为 apc 通道，再次圈中几个非弥散的、比较聚集的 beats 群体。 再次将圈门应用到所有样本中， 如果是 cba flex set 的数据，则 beats 门内的数据切换横坐标为 apc， 纵坐标为 apccy。 七通道圈中主要的几个非弥散的比较聚集的 beats 群体。再次应用圈门即可。 右击最后一个圈门的位置，在弹出的快捷菜单中使用 select equivalent nose 快速选中所有样本的这个相同圈门层级。再次右键点击， 在弹出的快捷菜单中选择 export 选项，将圈门后去除干净背景信号的数据进行导出另存，只需在弹出的对话框中选择一下保存路径， 点击 export 按钮即可。在弹出的对话框中可以直接勾选在新的 flow to 界面进行快速打开。 接下来我们就可以正式开始分析数据了。先来看下如何分析 cba kit 的数据。 在新的 flow 周界面中，选中任意一个传话过背景后的数据，点击 produce 中的 cba 插件，点击后会弹出一个提示你进行保存的界面，点击 进行保存，保存后就会自动弹出 cba 分析的新界面。在第一步操作界面中，我们将样本和标题的数据按框上文字提示进行分开摆放， 分配好后点击 next， 进入第二步操作界面，核对一下所有样本的 beats 全体军备有效识别即可，若有识别不精准的，可以双击图片手动进行微调， 调试好后即可点击 next 进入第三步操作分析。软件中已包含所有在售卖的 cba 的 kit 设计和信息， 可直接根据世纪和名称选中对应选项。软件会对 bis 的歌群体进行自动识别，但是 bis 的位置和名称不一定可以完全匹配，需要手动核对一下。 点击图片右上方的 cluster 按钮，这时每个音子对应的门名称就会显示出来，我们需要去人工复合一下。 aeb 位置对应的是最右边荧光信号最强的一群，随后依次为 a、 二、零三等，我们根据 best 位置双击门的名称，手动点选关联好对应右侧图中实际位置对应门的名字。调整完后，选中所有内容，右键选择弹窗中的第一选项， 再选中所有内容，选择第二个选项。 检查确认下其他样本都应用上后，点击 next 进入第四步操作。开始定义我们的标准曲线浓度。如果原始数据上进命名时比较规整，即可以自动 识别排序或手动按名称排序。若命名不规整，可以根据浓度 top 管的 mfi 值及荧光强度为最大的原理，点击 mfi 值的标签位置，将 mfi 值按照由最大到最小的顺序进行排列， 然后选中最高浓度管，在右侧输入 cba kit 对应的标，取最大浓度五千皮克每毫升，选择默认的一比二被稀释。点击带 load 按钮，左边集会自动匹配浓度， 令最后一管为仅有八分液的音讯管，因此选中这个管子。点击右侧的按钮，设置为 black 管的零值。设置好后，切换一下样本和对下确认所有代测，因此都已匹配好浓度设定之后点击 next， 进入第五步骤。标准曲线的 礼盒上方鼠标处为礼盒公式的选项位置一般都选用默认礼盒方法下方，这里为礼盒效果的展示，而方值越接近于一， sd 值越小，礼盒效果相对越佳。我们也可结合右侧礼盒区限图中 红色的你和曲线点、橙色的标取样本点和绿色的带侧样本的位置牌布来进行你和效果的评估， 然后挨个因子都核对一下标取情况。如果觉得有礼盒不是很好的情况，也可以选择其他的标取礼盒算法去选择一个最理想的礼盒方式。选择好礼盒曲线后，在下方框中分别输入标取和样本的西式倍数，如未西式则将数值设置为一。 设置好后点击 finalize 就会退出 cba 的分析界面。回到我们平时符龙咒分析完成后数据导出界面，在这里可以看 看到我们最终的结果，包括标取和数据结果查看，也无需做其他的手动导出操作，可以直接在我们最开始 cba 分析前提示保存的文件中查看所有结果的标取图和样本中每个因子的浓度。 样品各检测因子浓度的 excel 表中查看样本名称、对应的行以及 finalcc 对应的列的数值，即为你和的最终样本浓度，可直接用于进行后续的统计分析了。 分析的原始文件有需要的话，在关闭 flow 照的时候点击一下保存就可以了。 最后来看一下 cba flex set 的数据分析。在传话数据的新 flow 分析界面中，选中任意一个数据，点击 produce 中的 cba 插件，点击 后会弹出一个提示你进行保存的界面，点击 yes 进行保存，保存后就会自动弹出 cba 分析的新界面。 在第一步操作界面中，我们将样本和标取的数据按框上文字提示进行分开摆放， 分配好后点击 next 进入第二步操作界面。核对一下，所有样本的 beast 群体均被有效识别即可，若有识别不精准的，可以双击图片手动进行微调，调试好后即可点击 next 进入第三步操作 分析。软件中已包含所有在售卖的 cba 的 flexat 设计和信息，可直接根据设计和名称选中对应选项。 本次演示数据做的是小鼠的三因子，我们就选 选中其中的 mouse soluble protein 选项，再在上方切换至 custom 标签。选中实验中没有做到的因子，右键点击锐目进行删除， 最后仅保留实验做的三个因子，点击下方 slet 按钮，这时软件就会对选中的 beats 的各群体进行自动识别。但是 beats 的位置和名称不一定可以完全匹配， 需要先手动点击一下右侧的 cluster。 在双击流失展示图可以看到，当前软件自动礼盒的圈门并不合适将下方的两个圈圈在了一起。 没有关系，我们只需要跟常规流失操作中一样，点击坐标轴旁边的 t 按钮，调节放大一下座标轴，让它展示的分群更清晰后，再次点击一下 cluster， 就可以清晰的识别出对应 定数量的群体了。识别出群体之后呢，还是要核对一下 id 号，看是否和图中圈的门正确相互对应。 那在我们的 cba flex set 里，原理是使用的 x 轴 apc 和 y 轴 apccy 七来识别我们因子检测 is i 一号的相对位置的，如左侧示意图中 a 九相对位置就在右上角，依次往下就分别为 bcde， 依次往左就是八、七、六、五、四。根据当前选择的三个因子，最上面 b 就是 a 四的 interference， 加码下面两个，左侧的为 c 四的白借速十，右侧的为 c 五的白借速十七 a。 我们可以通过双击 id 号后面的 gate 门名称去进行因子位置和圈门的一一对应，调整完后 选中所有内容，右击选择弹窗中的第一个选项，再右击选择弹窗中的第二个选项。 检查确认下其他样本都应用上后，点击 next， 进入第四步操作，开始定义我们的标准曲线浓度。一般软件可以根据 mfi 值大小自动识别标取排序，但建议还是再核对一下，如果有错误的， 可手动点击 mfi 值的标签位置，将 mfi 值按照由最大到最小的顺序进行排列， 然后选中最高浓度管，在右侧输入 cba flag set 的常规标，取最大浓度两千五百匹克每毫升，选择默认的一比二被稀释。点击带路的按钮，左边集会自动匹配浓度，令最后一管为仅有八分液的音信管，因此选中这个管子。 点击右侧的按钮，设置为 black 管的零值。设置好后，切换一下样本和对下确认所有代测，因此都已匹配好浓度设定之后点击 next， 进入第五步骤。标准曲线的礼盒 上方鼠标处为你和公式的选项。位置一般都选用默认你和方法，如果觉得有你和不是很好的情况，也可以选择其他的标取。你和算法 下方这里为你和曲线参数的展示，我们也可结合右侧你和曲线图中红色的你和曲线点、橙色的标取样本点和绿色的带侧样本的位置排布来进行你和效果的评估。尽量三者在同一个线形上为好， 或者根据 r 方值越接近于一， sd 值越小，你和效果相对越佳。联合图式共同判断，选择一个最理想的你和算法。 无论选择哪一种算法其实都是可以的，只要能够表征自己的结果是在线性范围内就可以。 然后挨个因子都核对一下标取情况。选择好你和曲线后，在下方框中分别输入标取和样本的西式倍数，如位西式则将数值设置为一。 设置好后点击 finalize 就会退出 cba 的分析界面，回到我们平时 flow 轴分析完成后数据导出界面，在这里可以看到我们最终的结果，包括标取和数据 结果的详细查看，也无需做其他的手动导出操作，可以直接在我们最开始 cba 分析前提示保存的文件中查看。所有结果的标取图和样本中每个因子的浓度都是可以打开 查看的，这个就是标题的图，样品各检测因子的浓度也都可以在相应的 excel 表中查看，查看样本名称、对应的行以及 final cc 对应的列的数值，即为你和的最终样本浓度，可直接用于进行后续的统计分析了。 分析的原始文件有需要的话在关闭 flow 这的时候点击一下保存就可以了。