细菌染色操作流程

我们都知道微生物比较小，单凭肉眼是无法看见或看清的，但是我们可以借助生物显微镜来看清楚他的真实形态。由于微生物本身没有颜色，观察之前需要先对其进行染色。格兰仕染色是最常见的染色方法之一， 接下来我们演示具体操作。首先要准备好格兰式染色的事迹和耗材，包括代减菌、再拨片、格兰式染液、酒精灯、烧杯、无菌水、吸水纸和接重环。一、图片在灭菌后的在拨片中央滴一滴代减样品， 用一次性接重环将液体铺匀。 二、干燥，在拨片置于酒精灯上加热至水分蒸发。三、 固定在拨片，在酒精灯火焰上快速过两至三次，二到三秒后待冷却，目的是防止温度太高致使菌株失活。 四、初染迪迦一至两滴草酸胺结晶子染液，染色时间约一分钟，其原理是结晶子是碱性，染料可以与细胞核中的核酸结合，把核染成蓝色。 水洗，用小水流冲洗，在拨片冲洗至水成无色，目的是将多余的染剂冲洗干净，方便进行下一步。用吸水纸吸干边缘积水，等待干燥。 六、没染低适量格兰式染液，染色时间约一分钟，目的是可以使细菌的细胞壁能够更好的吸附染料，从而有助于区分细菌是否为格兰式阳性或者格兰式阴性细菌。七、水洗，用小水流冲洗，在 拨片冲洗至水成无色，等待干燥。八、脱色，再在拨片上低加百分之九十五乙醇，只留下乙醇不成紫色，大约用时半分钟后。水洗，用小水流冲洗，在拨片冲洗至水成无色，用吸水纸吸干边缘积水， 等待干燥。九、复染滴加一至两滴沙黄染液，染色时间约一分钟。十、水洗，用吸水纸吸干边缘积水，等待干燥。十一滴加香柏油， 待标本片干燥后，用生物显微镜观察。紫色或蓝紫色为格兰氏阳性菌，红色为格兰氏阴性菌。格兰氏染色法共十一个步骤，过程中需要注意把握图片的薄厚、加热温度、脱色时间及个染液质量。关注我们，学习更多实验知识！

本期带来的是夹膜染色的实验操作演示。夹膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色。不常用衬托染色法将菌体和背景着色，而把不着色其透明的夹膜衬托出来。 首先准备好夹膜染色所需试剂和耗材，包括草酸胺结晶、孜染色液、在拨片、酒精灯烧杯、无菌水、吸水纸和接种环。 一、图片在洁净无油腻的拨片中央放一小滴蒸馏水，用无菌的接种环挑取少量菌种，与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。 二、干燥图片在室温下使其自然干燥。自然干燥时间较长，可打开空调提高室内温度。需要注意夹膜很薄，易变形，所以 制片时一般不用热固定。三、染色，加适量草酸胺结晶子染色液于菌膜部位，以盖满菌膜围度染色一到二分钟。 四、水洗斜置在拨片，用水冲洗，直至洗下的水呈无色为止。五、干燥，自然干燥或用吸水纸吸去图片上的水。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。六、加一到两滴香柏油与图片处，防止硫酸铜结晶的形成。 七、净碱通常菌体是紫色，而背景是浅紫色，在菌体和背景之间会有一个透明圈，这个透明圈就是我们所说的夹膜。关注我们，学习更多实验知识！

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上期视频我们详细演示了格兰仕染色实验操作，本期教大家进行牙膏染色的实验，首先要准备好牙膏染色所需事迹和耗材，包括牙孢杆菌、孔雀绿染液、泛红水溶液、再拨片、酒精灯、 烧杯、无菌水、吸水纸和接种环。具体操作如下，一、将培养好的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌做图片，在灭菌后的在拨片中央滴一滴待检样品，用一次性接种环将液体铺匀干燥，在拨片置于酒精灯上加热至水分蒸发， 固定在拨片，在酒精灯火焰上快速过两至三次，两至三秒后待冷却。二滴加三到五滴孔雀绿染液予以固定的图片上。三、将在拨片在火焰上加热，使染液冒蒸汽，淡雾沸腾。 切记使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算，约四到五分钟，这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液染十分钟。需要注意， 加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或牙膏囊破裂，加热不够则牙膏难以着色。四、清去染液，待拨片冷却后，水洗至孔雀绿不再褪色为止，吸水只吸干边缘积水，等待干燥。 五、用泛红水溶液复染一分钟，水洗至水微无色。六、待干燥后至游进观察，打包成绿色，具体成红色，关注我们，学习更多实验知识。

今日课堂一分钟了解抗酸染色法抗酸染色法是在一八八二年有埃里西首创并经 f 其而改进而创造出的细菌染色法。 其中最具代表性的为对结合军的齐尔尼尔森染色法和齐尔加贝特染色法。 用石碳酸复红染色后用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色 集不再脱色而呈现石碳酸复红的红色。分支杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在太聚堂的外面，所以分支杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。