速学!脑片制备的关键步骤|膜片钳|电生理|实验操作全过程 制备脑片步骤: 1. 在振动切片机刀架上安装一把双刃剃须刀片,并用螺钉拧紧到位。 2. 设置切片厚度(脑切片为 300- 400 µm),将切割速度调整到所需设置(如视频中使用 0.15 mm/min)。 3. 把大脑放入预冷的 aCSF 溶液中。 4. 针对海马切片:切掉小脑,为放置大脑提供平坦表面,接着修剪一小部分前额皮质。 5. 用强力胶将大脑(小脑侧)粘到到振动切片机的槽上,使样本皮质面朝向刀片。 6. 在大脑后方、远离振动切片机一侧添加一块琼脂支撑,用于在切片过程中提供结构支撑。 7. 设置切片机的限位,定义切片的开始和停止位置,将振动切片机的频率设置为最大值(100 Hz)。 8. 使用向上摇杆按钮将缓冲液托盘和大脑移动到暴露表面正下方剃刀刀片边缘的位置,然后按开始按钮开始切片,切片操作时不断用冷 aCSF 溶液补充到切片槽内,保持脑组织冷却状态。 9. 若不熟悉大脑解剖结构,参考 Paxinos 和 Watson 的《小鼠大脑图谱》,确保切片正确的大脑区域。 10. 使用胶头滴管将目的区域的脑切片从槽中转移到预先装有冷冻 aCSF 的干净培养皿中。 11. 小心地沿中线将大脑切成两半,再将各个切片转移到预先充满 aCSF 的孵育槽中。 12. 将切片在室温下保存至少 1 小时,使脑组织从切片的机械冲击中恢复。 #铂梅斯 #膜片钳 #脑片 #实验操作 #科普一下
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