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PCR主要用于DNA序列的扩增和检测;qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量;RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测;而RT-qPCR则结合了RT-PCR和qPCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。 PCR(聚合酶链式反应) 概念:PCR是一种体外扩增DNA分子的技术,利用DNA聚合酶和多个引物在所需温度下扩增目标DNA分子。其反应过程包括预变性、变性退火延伸和延伸三个阶段。 变性:将双链DNA加热至94~96°C,使其解链为单链。 退火:降低温度至50~65°C,使引物与单链DNA互补结合。 延伸:在70~75°C下,DNA聚合酶沿着单链DNA合成新的互补链。 qPCR(实时定量聚合酶链式反应) 概念:qPCR是一种实时检测PCR过程中荧光信号变化的技术,可以定量检测目标分子的含量。通过在反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中实时监测荧光信号的变化,从而计算出目标分子的拷贝数。 荧光标记:在PCR反应液中加入荧光标记物,如SYBR Green I或TaqMan探针。 荧光信号监测:在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。 数据记录与分析:每个循环结束后,通过光学系统记录荧光信号的增加,最后由软件计算出数据,用于实验结果的分析。 RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应) 概念:RT-PCR是一种把RNA分子转录为cDNA后,在体外进行DNA扩增的技术。它结合了反转录和PCR两个步骤,主要用于RNA分子的扩增和检测。 逆转录:以RNA为模板,在逆转录酶的作用下合成cDNA第一链。 PCR扩增:将cDNA作为模板,进行传统的PCR扩增。 RT-qPCR(逆转录实时定量聚合酶链式反应) 概念:RT-qPCR是一种结合了逆转录PCR和实时定量PCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。先通过反转录酶将RNA逆转录成cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。 逆转录:将RNA逆转录为cDNA。 实时定量PCR:在qPCR过程中实时监测荧光信号的变化,实现对cDNA的定量分析。 #PCR #qPCR #RT-PCR #RT-qPCR #DNA
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徐伟忠6天前
果蔬储藏中的成分变化与保鲜技术要点 果蔬采收后并非停止生命活动,其化学成分会在储藏过程中随呼吸代谢、酶促反应持续变化,掌握这些变化规律是制定科学保鲜技术的核心依据。 糖分作为果蔬呼吸代谢的主要能量来源,会在储藏中不断消耗,储藏时间越长,糖分减少越多,口感也随之变淡。但部分果蔬(如番茄)在储藏初期会出现“变甜”现象,这并非糖分增加,而是有机酸消耗速度快于糖分,导致糖酸比升高,甜味感知更明显。有机酸同样会因呼吸作用减少,在氧气不足的无氧呼吸环境下,消耗速度会加快——如气调储藏中若氧气浓度过低,有机酸消耗会显著增加。同时,有机酸的变化还会影响酶活性、色素稳定性及抗坏血酸(维生素C)的保存,有机酸含量降低会加速果蔬衰老与品质劣变。 单宁物质在储藏中易发生氧化反应,尤其在果蔬受到机械损伤时,伤口处会快速褐变,形成暗红色或褐色斑点,不仅影响外观,还会降低商品价值。芳香物质因具有挥发性,会随储藏时间推移不断散失,加上酶的分解作用,果蔬的香气会逐渐变淡;此外,部分芳香物质(如苹果释放的香气成分)具有催熟作用,若储藏环境密封不通风,芳香物质积累会加速未成熟果蔬的成熟与衰老,缩短保鲜期。 针对这些变化,需通过精准技术手段调控储藏环境,核心保鲜技术包括以下几方面: 一是预冷处理。果蔬采收后携带“生长热”(田间热量),会加速呼吸代谢与水分蒸发,预冷的目的就是快速消除这部分热量。常见的预冷方式有空气预冷、水预冷、真空预冷,如白菜采收后温度可达30℃,需通过预冷降至0 - 15℃,以抑制呼吸作用、减缓新陈代谢,减少失重、黄化、萎蔫等问题。 二是气调储藏。通过调节储藏环境中的气体成分,增加二氧化碳浓度、降低氧气浓度,抑制果蔬呼吸与微生物活动。但不同果蔬对二氧化碳的耐受阈值差异较大:菠萝、番木瓜的耐受度不超过10%,苹果、梨、柑橘对二氧化碳较敏感,浓度过高易受伤害;而樱桃、草莓、龙眼的耐受度较高,可适当提高二氧化碳浓度。 三是清洗与包装。预冷后部分果蔬需清洗,目的是去除表面污物与病菌,减少交叉感染,清洗时可添加适量杀菌剂或保鲜剂,进一步提升保鲜效果;若基地配备电动冷水设备,可用碱水或酸水清洗,兼顾降温与杀菌。包装则需根据果蔬特性选择合适材料,核心作用是保湿(防止水分流失导致萎蔫)、保护(避免机械损伤),配合冷库使用可大幅延长保鲜期。 此外,物理保鲜技术(如电场保鲜)也在不断发展,为果蔬储藏提供更多解决方案。#徐伟忠
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