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高中生物选三第61题 61干旱胁迫会引起植物细胞内重要生理代谢途径紊乱,如细胞呼吸电子传递链受损、光反应中电子散逸,细胞内活性氧自由基(ROS)积累等,因此干旱胁迫下ROS对膜脂质、蛋白质及DNA等 的氧化损伤是植物损伤的重要方式。Lon1蛋白具有降低叶绿体和线粒体内ROS产生,维护细胞正常代谢的功能。某研究团队以耐干旱胁迫突出的“夏普蓝”蓝莓为材料,构建了如下图所示表达载体,导入烟草后以研究Lon1蛋白在植物应对干旱胁迫时的相关功能。回答下列问题: (1)获取目的基因及构建重组表达载体。通过检索基因数据库,获得_____,以此设计引物并在引物的5'端添加____。由图可知,Sma I识别位点位于目的基因模板链的____端。PCR扩增产物可用电泳技术分离后将含有___切割下来以便回收并提纯。 (2)利用农杆菌转化烟草细胞及培育转基因植株。使用的外植体是带有伤口的叶圆片,将重组的农杆菌和叶圆片共培养一段时间,该过程需控制_____(答两点)和pH、温度等环境条件,以保证外植体的存活率和转化率均较高。将共培养后的叶圆片转入添加适当抗生素的培养基上培养,目的是__。培养基中还含__(答两点)等有机成分及植物生长调节剂来调控叶圆片细胞脱分化、再分化过程,从而得到转基因烟草植株。 (3)筛选转基因烟草植株及耐旱特性观察鉴定。选取转基因烟草叶片,将其置于含______的鉴别培养基中染色,若叶片出现蓝色斑点即为转基因烟草转化成功。染色前需对叶片进行______处理,以防对结果产生干扰。将转基因烟草叶片,一组置于添加10%PEG的MS培养基中培养,另一组置于未添加PEG的MS培养基中培养。添加10%PEG的作用是____。另取野生型烟草叶片作为对照。 (4)电镜下显示正常培养的烟草细胞叶绿体、线粒体形态结构完整。添加PEG的野生型烟草细胞出现叶绿体基粒片层结构模糊,线粒体变形嵴断裂等现象,而添加PEG的转基因烟草细胞未出现上述现象;检测各组植株叶绿素相对含量,结果如下图。推测干旱胁迫下Lonl蛋白可能是通过______,来维护光合作用的正常进行,从而抵御干早。 61 (1)Lonl基因序列 相应的限制酶识别序列 3’ 目的基因条带的凝胶 (2)农杆菌的浓度、共培养的时间等(2分) 杀死农杆菌并筛选含有目的基因的植物细胞 糖类、氨基酸、维生素等(答两点即可) (3)X-Gluc
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