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CCK8全流程教学(视频版~~) 哈喽宝子们 我是盛夏学姐 今天带大家来学习一下 CCK8的计数、铺板全流程 知识点+技巧吧 🌟🌟实验物品 铺好板的细胞、1ml移液枪、100ul移液枪、10ul移液枪、完培、PBS、胰酶、96孔板、细胞计数板 (⚠️⚠️学姐此次选择的移液枪是吉尔森的移液枪) 🌟🌟实验步骤 1.将细胞从孵箱内取出,弃培养基,此环节使用1ml移液枪; 2.pbs清洗一遍,加入1ml胰酶,此环节使用1ml移液枪; 3.细胞放入孵箱消化,3min; 4.以1:3(胰酶:完培)终止胰酶,细胞一定要多次吹打混匀,但用力不能太大;若吹打不够,细胞易成团,细胞吹打过度,细胞会破碎,导致测量OD值不准。吉尔森的移液枪吸力适当,吹打以后,细胞单个悬浮,见后面的铺板完成的图片; 5.800r,5min,离心; 6.离心后取出一个新的ep管记为“100”,装有细胞的ep管记为原液,分别向两个离心管内加入1ml完培;吹打混匀原液管,取出100ul加入“100”管,方便后期反推细胞数的悬液体积; 7.准备10ul移液枪,对“100”管取出10ul进行细胞计数,具体方法见视频; 8.计数完以后,确定所需细胞数的对应原液体积后,开始铺板; 9.将96孔板边缘孔加入100ul pbs,防止测量途中药物及完培挥发; 10.取出一个全新的ep管,加入计算好的完培(100ul/孔),从原液取出计算好对应孔数的总悬液体积,去除吉尔森的100ul移液枪,开始铺板; 11.每5个孔对此吹打以后,再进行铺板,铺板时移液枪打至一档即可,最好不要吸一打二,视频最后大家可以看到随机观察孔的细胞密度是相近的。 (⚠️⚠️移液枪是否准确也会影响细胞铺板是否均匀,因为某些移液枪吸一打一以后会有部分残留,吉尔森的移液枪弃上清后,ep管内上清残留少;上清打出后枪头内残留也少,量程准确度较高) 大家学会了吗? 评论区继续讨论和答疑👇👇#科研日常 #细胞实验 #科研大吉#CCK8实验 #超吉移液器
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