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医学SCI 实验干货 | 从头到尾!一文读懂qPCR全流程一、qPCR是啥?和普通PCR有啥区别?🤔 普通PCR:只能告诉你“有没有目标DNA”(定性)。 qPCR:不仅能定性,还能定量告诉你“有多少目标DNA”🎯! 关键技能:实时监测DNA扩增,用荧光信号推算初始浓度 二、必懂名词解释!🔍 1️⃣ Ct值(Threshold Cycle) 👉 定义:荧光信号达到阈值所需的循环数。 👉 口诀:Ct值小=目标多(比如Ct=20比Ct=30浓度高10倍!)💡 2️⃣ 荧光探针/染料 SYBR Green🌿:绑定双链DNA就发光,便宜但可能“乱报”(非特异结合)。 TaqMan探针🔦:精准识别目标DNA才发光,贵但靠谱! 3️⃣ 熔解曲线📉 👉 用途:验货!单一峰=产物纯,杂峰=有“假货”(非特异扩增)。 4️⃣ 内参基因(如GAPDH、β-actin) 👉 作用:当“标尺”📏,消除样本差异(比如RNA提取量不同)。 三、操作流程⚙️ 备样本:提DNA/RNA(测RNA需反转录成cDNA)。 配试剂:加引物、探针、酶、模板,摇匀!🧪 上机跑程序: 变性(95℃🔥):拆开DNA双链。 退火(60℃❄️):引物精准配对目标序列。 延伸(72℃🌡️):合成新DNA链。 每个循环采荧光💡! 数据分析📊:用Ct值+标准曲线算浓度。 四、应用领域超广!🌐 医学:新冠检测🦠、HPV筛查、癌症基因诊断。 科研:比较基因表达差异(比如药物处理vs对照组🔬)。 农业:检测转基因成分🌽。 环境:追踪水源中的致病菌💧! 五、避坑指南❗ 阴性对照🚫:不加模板,排查污染! 阳性对照✅:加已知目标DNA,验证实验有效。 Ct值异常高?🤯:可能样本浓度太低,或试剂有抑制物! 假阳性👻:优化引物设计+严格分区操作(样本vs试剂分开)。 总结🎉 qPCR=灵敏度高+定量准,是分子生物学的“扛把子”!掌握Ct值、熔解曲线、内参基因,实验数据更靠谱~ 看完这篇,你也能和qPCR愉快玩耍啦!🚀 #医学sci #sci #sci论文 #医学sci写作 #qPCR @DOU+小助手
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