CCK8全流程教学(视频版~~) 哈喽宝子们 我是盛夏学姐 今天带大家来学习一下 CCK8的计数、铺板全流程 知识点+技巧吧 🌟🌟实验物品 铺好板的细胞、1ml移液枪、100ul移液枪、10ul移液枪、完培、PBS、胰酶、96孔板、细胞计数板 (⚠️⚠️学姐此次选择的移液枪是吉尔森的移液枪) 🌟🌟实验步骤 1.将细胞从孵箱内取出,弃培养基,此环节使用1ml移液枪; 2.pbs清洗一遍,加入1ml胰酶,此环节使用1ml移液枪; 3.细胞放入孵箱消化,3min; 4.以1:3(胰酶:完培)终止胰酶,细胞一定要多次吹打混匀,但用力不能太大;若吹打不够,细胞易成团,细胞吹打过度,细胞会破碎,导致测量OD值不准。吉尔森的移液枪吸力适当,吹打以后,细胞单个悬浮,见后面的铺板完成的图片; 5.800r,5min,离心; 6.离心后取出一个新的ep管记为“100”,装有细胞的ep管记为原液,分别向两个离心管内加入1ml完培;吹打混匀原液管,取出100ul加入“100”管,方便后期反推细胞数的悬液体积; 7.准备10ul移液枪,对“100”管取出10ul进行细胞计数,具体方法见视频; 8.计数完以后,确定所需细胞数的对应原液体积后,开始铺板; 9.将96孔板边缘孔加入100ul pbs,防止测量途中药物及完培挥发; 10.取出一个全新的ep管,加入计算好的完培(100ul/孔),从原液取出计算好对应孔数的总悬液体积,去除吉尔森的100ul移液枪,开始铺板; 11.每5个孔对此吹打以后,再进行铺板,铺板时移液枪打至一档即可,最好不要吸一打二,视频最后大家可以看到随机观察孔的细胞密度是相近的。 (⚠️⚠️移液枪是否准确也会影响细胞铺板是否均匀,因为某些移液枪吸一打一以后会有部分残留,吉尔森的移液枪弃上清后,ep管内上清残留少;上清打出后枪头内残留也少,量程准确度较高) 大家学会了吗? 评论区继续讨论和答疑👇👇#科研日常 #细胞实验 #科研大吉#CCK8实验 #超吉移液器
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哈喽宝子们 我是盛夏学姐 今天带大家一起来 进行细胞总RNA提取 还有RNA浓度测量教学哦 🌟🌟实验步骤 TRIz0l 法抽提总 RNA 1、组织 100mg,剪碎,加 1mlTRIzol匀浆(要彻底),细胞刮取即可;颠倒混匀 10下。 2、室温5分钟,加氯仿 1/5 体积 (0.2ml)(必须按总体积的 1/5),颠倒混匀 15S, 室温放置2-5 分钟。 3、4度,离心 12000g,15分钟。 4、转上层水相(约 500u)于另一 1.5mlEP 管中加等体积异丙醇 (约 S00g1),混匀,室温 15 分钟。 5、4度,离心 12000g,10 分钟 6、弃上清,加冰预冷的75%乙醇(用 DEPC 水配) 1ml。 7、4度离心 7500g,5分钟。 8、弃上清(洗两次rna更纯),空气千燥 5-10-分钟(不能完全干燥)。 9、溶于 DEPC 水中,其实也可以用高压后的dd水代替 (10u1-20u1,视沉淀而定) 🌟🌟经验 1.如果细胞量比较少时,可以所有试剂减半提,才能保证RNA浓度; 2.洗细胞的PBS一定不能用自己配完高压的,否则会影响RNA的纯度,学姐用的是“逸漠生物”的pbs,非常好用呢;他们的公众号“逸漠生物”可以领取产品试用装哦。 3.学姐此次用到的1.5ml的ep管是碳基生命的,他们的细胞实验耗材都不错,他们公众号“碳基生命”也可以薅羊毛哦, 4.75酒精洗rna的时候,建议清洗2-3次,75酒精建议用高压后的dd水和无水乙醇配制; 5.枪头、ep管都需要高压; 6.新手提取和测量rna时都建议带口罩帽子,避免影响rna的纯度; 7.如果使用试剂盒提取后rna浓度不够,直接用trizol提,trizol法是提rna最棒的(不过不好闻)。 8.想到再补充吧。 大家学会了吗? 关🐷+私聊进答疑群👇👇#逸漠生物pbs#科研 #生命科学 #实验室日常 #rna提取
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