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威奥 | 小白轻松上手的组织芯片制备流程 组织芯片制作流程详解 1.样本收集与预处理 - 样本来源: - 人体或动物组织(如肿瘤、正常组织、疾病模型组织等)。 - 需明确临床病理信息(如分期、分级、分子分型等)。 -预处理: - 固定:福尔马林固定(24-48小时),防止组织降解。 - 脱水:梯度酒精(70%-100%)脱水,清除水分。 - 透明化:二甲苯置换酒精,为石蜡渗透做准备。 - 包埋:浸蜡(60°C石蜡)后冷却成块,形成标准石蜡块。 2.组织样本阵列设计 核心提取: - 样本进行HE片染色,病理医师标记指导,选择目标区域。需避开坏死或低质量区域,确保样本代表性。 - 从供体石蜡块中精准钻取目标区域(直径0.6-2.0mm圆柱形组织芯)。 阵列排布表制作 3.受体蜡块制备 材料:高密度石蜡块(硬度适中,避免切片碎裂)。 打孔:使用空心针在受体蜡块上规则打孔(孔径1.5-2.0mm,孔距0.2-0.5mm)。 - 阵列排布: - 按预设方案将组织芯插入受体蜡块孔中(如10×10矩阵)。 - 可设计多区域对照(正常组织、阳性/阴性对照、质控样本)。 4.融合与切片 融合加固: - 将受体蜡块加热(50-55°C),使供体组织芯与受体蜡融合。 - 冷却固化后形成完整TMA蜡块。 切片: - 使用高精度切片机(厚度3-5μm),连续切片并贴附于玻片上。 - 每张玻片可获数十至数百个组织点,满足多重实验需求。 5.质量控制(QC) HE染色验证: - 随机切片染色,显微镜检查组织完整性及定位准确性。 - 排除脱片、折叠或定位偏移的失败样本。 标记核对: - 通过免疫组化(IHC)或荧光标记确认目标分子表达一致性。 - 扫描存档(高分辨率数字病理系统,如20x/40x成像)。 6.数据管理与应用** 数字化存储: - 将TMA玻片信息与临床数据关联(如样本编号、病理参数)。 - 建立数据库支持快速检索与分析。 下游实验: - 适用于免疫组化(IHC)、多重免疫荧光(mIHC)、荧光原位杂交(FISH)、RNA/DNA提取等高通量检测。 #组织芯片 #病理切片 #多重免疫荧光染色 #HE染色 #免疫组化
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